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新虫 (小有名气)

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[交流] 做蛋白-抗体互作，Biacore死活没信号已有1人参与

纯化好的抗体，抗原也是重组蛋白，ELISA检测阳性很明显。换Biacore跑蛋白-抗体相互作用，结果一点信号都没有。
抗体用氨基偶联固定在CM5芯片上，固定了大概200RU。抗原稀释到不同浓度流过去，从100nM到1μM都试了，结合响应几乎没有变化。样品缓冲液也匹配了，再生条件摸索了好几轮还是老样子。
做蛋白-抗体实验的大佬们，帮我看看问题可能出在哪？是偶联水平不够？还是抗原活性有问题？或者芯片类型没选对？
另外想确认一下，实验前需要测蛋白-抗体的真实浓度吗？有没有可能是定量不准导致的？求指点，先谢过各位了。

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