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做蛋白-抗体互作,Biacore死活没信号 已有1人参与
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纯化好的抗体,抗原也是重组蛋白,ELISA检测阳性很明显。换Biacore跑蛋白-抗体相互作用,结果一点信号都没有。 抗体用氨基偶联固定在CM5芯片上,固定了大概200RU。抗原稀释到不同浓度流过去,从100nM到1μM都试了,结合响应几乎没有变化。样品缓冲液也匹配了,再生条件摸索了好几轮还是老样子。 做蛋白-抗体实验的大佬们,帮我看看问题可能出在哪?是偶联水平不够?还是抗原活性有问题?或者芯片类型没选对? 另外想确认一下,实验前需要测蛋白-抗体的真实浓度吗?有没有可能是定量不准导致的?求指点,先谢过各位了。 |
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