| 查看: 32 | 回复: 0 | |||
[交流]
wb条带脏，可能不是抗体的问题
|
|
很多人一看到WB条带脏，第一反应就是： “抗体不行。” 但我想说，抗体背锅太多次了。 条带脏、背景高、非特异性强，有时候不是抗体问题，而是样品本身就不干净。 尤其是做重组蛋白验证时，如果前面的蛋白表达和纯化没做好，后面WB很难漂亮。 比如： 裂解液杂蛋白太多； 目标蛋白纯度不够； 洗杂条件太弱； 洗脱样品里盐分或杂质影响后续实验。 这些问题都会反映在WB结果里。 所以我现在做重组蛋白相关实验，会特别关注纯化这一步。手动纯化不是不能用，但对新手来说确实容易波动。流速、洗杂体积、换管时机都可能影响最终样品质量。 如果实验室经常做蛋白表达和抗体验证，可以考虑用自动化纯化设备把流程稳定下来。像小易蛋白纯化仪这种小型设备，可以适配Ni柱、Protein A柱等常用纯化方案，比较适合日常验证实验。 WB不是孤立的实验。 前面纯化越稳，后面条带越省心。 发自小木虫手机客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有104人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复