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wb条带脏，可能不是抗体的问题
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很多人一看到WB条带脏，第一反应就是： “抗体不行。” 但我想说，抗体背锅太多次了。 条带脏、背景高、非特异性强，有时候不是抗体问题，而是样品本身就不干净。 尤其是做重组蛋白验证时，如果前面的蛋白表达和纯化没做好，后面WB很难漂亮。 比如： 裂解液杂蛋白太多； 目标蛋白纯度不够； 洗杂条件太弱； 洗脱样品里盐分或杂质影响后续实验。 这些问题都会反映在WB结果里。 所以我现在做重组蛋白相关实验，会特别关注纯化这一步。手动纯化不是不能用，但对新手来说确实容易波动。流速、洗杂体积、换管时机都可能影响最终样品质量。 如果实验室经常做蛋白表达和抗体验证，可以考虑用自动化纯化设备把流程稳定下来。像小易蛋白纯化仪这种小型设备，可以适配Ni柱、Protein A柱等常用纯化方案，比较适合日常验证实验。 WB不是孤立的实验。 前面纯化越稳，后面条带越省心。 发自小木虫手机客户端 |
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