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传代前的准备工作：这些细节决定成败！🔍
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1️⃣ 所需试剂和材料清单 首先，传代前我们需要准备这些材料（记得提前取出预热哦）： 完全培养基：含10%FBS的DMEM/1640等，根据细胞类型选择 PBS缓冲液：用于洗涤细胞，去除血清等成分 胰蛋白酶：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液（某些敏感细胞可用0.05%浓度） 无菌吸管：5ml、10ml规格各备几支 新培养皿/瓶：提前标记好日期和细胞信息 移液枪和枪头：确保数量充足且无菌 2️⃣ 无菌操作环境的准备 无菌环境直接关系到你的细胞是否能健康生长，千万马虎不得： 紫外灯消毒：使用前至少30分钟（最好45-60分钟），确保彻底杀灭微生物 75%酒精擦拭：先喷洒后擦拭，顺序是从里到外、从上到下，特别注意工作台表面和侧壁 个人防护：实验服要干净，戴无菌手套，头发要扎起来，避免悬于工作台上方 3️⃣ 显微镜观察细胞状态 决定是否传代，关键在于准确判断细胞状态： 细胞密度：大多数贴壁细胞在80-90%汇合度时最适合传代 细胞形态：健康细胞形态饱满、轮廓清晰、贴壁良好 培养液颜色：由红变黄表明pH降低，代谢废物增多 细胞碎片：过多的漂浮物表明细胞状态不佳，可能需要换液而非直接传代 4️⃣ 传代比例的选择依据 宝子们记住，不同细胞的传代比例差异可大了！ 快速生长型细胞（如HeLa、HEK293）：可采用1:6~1:10的比例，约2-3天传一次 中等生长型细胞（如A549、HepG2）：采用1:3~1:5的比例，约3-4天传一次 生长缓慢型细胞（如某些原代细胞）：采用1:2的比例，可能需要5-7天才传一次 干细胞和特殊细胞：通常需要按照特定密度播种，如5×10^4/cm^2，而非简单比例 5️⃣ 记录细胞代数的重要性 每次传代都必须详细记录，包括： 传代日期和时间 细胞代数（P数，如P5表示第5代） 传代比例或密度 培养基配方和特殊添加物 操作者姓名（对，就是你！） 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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