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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » Rt-pcr β-actin有的能出来有的出不来是何原因？
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gynan123

金虫 (小有名气)

[交流] Rt-pcr β-actin有的能出来有的出不来是何原因？ 已有1人参与

RNA分装时一部分去测OD值，500多，剩下的分装为2管贮存于-80冰箱中，难道都降解了？为什么一点条带都没有？
  β-actin有的样品出来了条带也很亮，证明条件没什么问题吧
  试剂都是用的是原来剩的
RT 过程有问题的话，什么原因能出现这种情况？
恳请各位大侠指点！！！万分感谢！！
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1楼 2009-11-17 13:15:33
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★
1949stone(金币+1,VIP+0): 11-17 17:34
gynan123(金币+1,VIP+0):试剂的问题，呵呵，做出来了！ 11-19 21:52
配体系的操作问题吧
条件不会有问题  就是试剂和样品的问题了
检查一下过程，仔细做一次
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2楼2009-11-17 13:22:45
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yangym1123

木虫 (小有名气)
是不是反转录过程有了问题呢？actin验证不出来的cDNA很难保证质量的！
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3楼2009-11-17 13:27:52
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-17 17:35
gynan123(金币+1,VIP+0):万分感谢！我再试试，我可怜的样品快没了，可能得重新造模了 11-17 20:05
RNA检测是用OD值吗，我们提RNA都是电泳检测啊，如果18和25S2条带比较清晰就OK了。我想可以试着换个引物再检测一下，或者用以前反转成功的做阳性对照再P，这样都没有的话就可能是反转失败了吧。你的RNA可以跑胶看看啊，不过尽量在最后一步在这样做吧，RNA本身就太不稳定了，-80拿出来估计也就这一次寿命了。
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4楼2009-11-17 14:09:22
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gynan123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2009-11-17 14:09:
RNA检测是用OD值吗，我们提RNA都是电泳检测啊，如果18和25S2条带比较清晰就OK了。我想可以试着换个引物再检测一下，或者用以前反转成功的做阳性对照再P，这样都没有的话就可能是反转失败了吧。你的RNA可以跑胶看看 ...

OD测浓度的啊，我跑胶5s比较亮。
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5楼2009-11-17 20:14:28
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pidou

木虫 (正式写手)
那我只能说你的RNA降解的很厉害了！～～
引用回帖:
Originally posted by gynan123 at 2009-11-17 20:14:28:

OD测浓度的啊，我跑胶5s比较亮。

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6楼2010-04-01 00:03:43
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gynan123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gynan123 at 2009-11-17 20:14:28:

OD测浓度的啊，我跑胶5s比较亮。

有一个样品测得浓度6000多，其他的都是1000、2000多，怎么回事？260/280是1.83
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7楼2010-04-12 13:40:38
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