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Ki67染色原理及步骤
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01 细胞周期细胞周期指的是细胞从一次分裂完成到下一次分裂结束的全过程，分为分裂间期和分裂期。 1. 分裂间期（Interphase）占据细胞周期的绝大部分时间，是细胞为分裂做物质准备的阶段，细分为 3 个亚期：G1期：又称 DNA 合成前期，是细胞分裂结束后进入的第一个阶段。核心事件是合成 RNA 和相关蛋白质，为后续 DNA 复制做准备，同时细胞体积增大，完成必要的代谢准备。S 期：又称 DNA 合成期，是间期的核心阶段。核心事件是DNA 分子的复制，完成遗传物质的加倍，同时组蛋白等染色质相关蛋白也同步合成，确保每条染色体形成两条完全相同的姐妹染色单体。G2期：又称 DNA 合成后期，是分裂前的最后准备阶段。核心事件是继续合成 RNA 和相关蛋白质（如纺锤体相关蛋白），完成细胞分裂所需的物质和能量储备，为进入分裂期做最终准备。 2. 分裂期是细胞完成遗传物质分离、实现一分为二的阶段，即有丝分裂期，细分为 4 个亚期，每个时期的形态学事件在图中都有详细标注：• 前期（Prophase）：核膜、核仁逐渐消失，染色质高度螺旋化形成染色体，纺锤体开始形成。• 中期（Metaphase）：染色体的着丝点整齐排列在细胞中央的赤道板上，此时染色体形态最稳定、数目最清晰，是观察染色体的最佳时期。• 后期（Anaphase）：着丝点分裂，姐妹染色单体分离，成为两条独立的子染色体，并在纺锤丝牵引下分别向细胞两极移动。• 末期（Telophase）：染色体解螺旋变回染色质，纺锤体消失，核膜、核仁重新出现，细胞缢裂为两个子细胞，完成一次细胞分裂。 02 Ki-67 染色原理Ki-67 是一种核内增殖相关抗原，由 MKI67 基因编码，其表达具有严格的细胞周期依赖性：仅在增殖细胞（处于活跃细胞周期的细胞）中表达，在G0期（静止期）细胞中完全不表达；在分裂间期的 G₁、S、G₂期均有表达，且在 M 期（分裂期）表达量达到峰值，分裂结束后迅速降解。2. Ki-67 染色的技术原理Ki-67 染色是免疫组化（IHC）技术的经典应用，核心原理是抗原 - 抗体的特异性结合（免疫组化和免疫荧光都可实现）：1. 抗原暴露：对组织切片进行脱蜡、抗原修复（如热修复、酶修复），充分暴露细胞内的 Ki-67 抗原表位；2. 一抗结合：加入特异性针对 Ki-67 的单克隆 / 多克隆一抗，一抗会与细胞内的 Ki-67 抗原特异性结合；3. 二抗放大与显色：加入标记了酶（如辣根过氧化物酶 HRP、碱性磷酸酶 AP）或荧光基团的二抗，二抗与一抗结合，实现信号放大；◦酶标二抗：加入对应的显色底物（如 DAB，产生棕黄色沉淀），在显微镜下观察到阳性染色；◦荧光二抗：直接在荧光显微镜下观察荧光信号；4. 结果判读：Ki-67 阳性信号定位于细胞核，阳性细胞即为处于增殖周期的细胞；通过计数阳性细胞占总细胞的比例，得到Ki-67 增殖指数，用于评估细胞增殖活性。 |
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