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[交流]
实验干货!提取RNA超详细操作步骤
1️⃣RNA如何提取?
细胞中的RNA可以分为信使RNA、转运RNA和核糖体RNA三大类,不同组织总RNA提取的实质就是将细胞裂解,释放出RNA,并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质,最终获得高纯度RNA产物的过程。最常用的RNA提取方法是Trizol方法。
2️⃣原理
Trizol内含异硫氰酸胍能迅速破碎细胞,同时使核蛋白复合体中的蛋白变性并释放出核酸,由于释放出的DNA和RNA在特定pH值下的溶解度不同,且分别位于中间相和水相,从而使DNA和RNA得到分离,取出水相后,通过有机溶剂(氯仿)抽提及异丙醇沉淀,可得到纯净RNA。
3️⃣注意事项
组织体积不可超过TRIzol的10%,易有DNA污染。
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