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科研战神来了新虫 (小有名气)
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[交流]
细胞实验里各种 RNA 转染 到底在干嘛？
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做细胞实验，天天跟siRNA、shRNA、mRNA、sgRNA打交道，转染这个、转染那个，目的是什么呢，效果有什么不一样呢？ 01mRNA转染mRNA转染的效果如下图：直接给细胞提供翻译模板，快速翻译出蛋白质，不用整合到基因组中，无插入突变的风险特点是极快、瞬时、强表达。持续时间大概2～4 天。适用场景：快速看蛋白功能、不整合基因组；疫苗研发；蛋白功能验证等。质粒DNA转染：质粒转染是将携带目的基因的质粒 DNA 送入真核细胞，借助细胞自身的转录、翻译系统表达目标蛋白。在瞬时转染中，质粒以游离形式存在于细胞核内，不整合到基因组，表达强度在 24～72 小时达到峰值，随后逐渐下降。若要实现稳定表达，需通过抗性筛选富集极少数随机整合到细胞染色体上的细胞；普通质粒不具备整合能力，只有极少数会随机整合。 02siRNA 转染siRNA是人工合成的双链RNA，进入细胞后可直接触发 RNA 干扰（RNAi），从而敲低特定基因的表达。 03shRNA 转染转染shRNA 转染是指将表达短发夹 RNA（short hairpin RNA, shRNA）的载体（质粒或病毒载体）送入真核细胞，通过细胞内加工生成 siRNA，最终实现RNA 干扰（RNAi）、特异性沉默靶基因表达的技术。 04sgRNA 转染sgRNA 需要和Cas9蛋白/质粒共转染，它引导Cas9 蛋白去切割基因组上的目标 DNA。特点：可以实现敲入/敲除/点突变 总结：1.mRNA 转染：直接在胞质翻译蛋白，瞬时、快速、安全无整合，适用于蛋白快速表达与功能验证；2.质粒 DNA 转染：入核转录表达，瞬时转染不整合、表达短暂；稳定表达需筛选随机整合细胞，普通质粒无高效整合能力；3.siRNA 转染：人工合成双链 RNA，触发 RNAi、快速敲低基因，作用瞬时，操作简便；4.shRNA 转染：由载体转录生成，经加工形成 siRNA，沉默更稳定持久，病毒载体可实现长期基因沉默；5.sgRNA 转染：需与 Cas9 共转，直接编辑基因组 DNA，可实现基因敲除、敲入与定点突变，效果可遗传。 |
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