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狼狼晴空

木虫 (著名写手)

[交流] 郁闷的细胞培养!复苏后。。。。

最近一两个月,我和师姐养的MCF-7细胞总是夭折!
复苏后第一天成团,第三天就看不到细胞了,但是在培养皿底部铺着一层像是细沙状的淡黄色的东西,应该不是细菌。培养基颜色没改变。
细胞是今年5月份冻存的,在-80摄氏度冰箱。
之前有一批细胞复苏后长满瓶,状态还可以,但是传代后也成上面那样了,没有细胞了,只有细沙状东西。
另外,新配置培养液在4摄氏度冰箱里放置,颜色变紫,应该是碱性了,有的文献说可以放在培养箱中纠正Ph值,,放半个小时怎么感觉没什么太大改变呢?老师让重新调整pH,不能每次用都调吧,调了就得重新过滤除菌,,很麻烦的!!!
郁闷啊,老师催的紧,却找不到问题根源!
望大家帮忙啊!

[ Last edited by 狼狼晴空 on 2009-11-16 at 09:07 ]
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


狼狼晴空(金币+1,VIP+0):是啊,正在想这可能是主要原因吧。 11-16 18:15
-80摄氏度冰箱不能长期放吧
3楼2009-11-16 10:37:10
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


狼狼晴空(金币+1,VIP+0):不知道。支原体污染无法简单的检查出来吧。 11-16 09:09
引用回帖:
Originally posted by 狼狼晴空 at 2009-11-15 22:25:
最近一两个月,我和师姐养的MCF-7细胞总是夭折!
复苏后第一天成团,第三天就看不到细胞了,但是在培养皿底部铺着一层像是细沙状的淡黄色的东西,应该不是细菌。培养基颜色没改变。
细胞是今年5月份冻存的,在- ...

是不是有支原体污染呢?
2楼2009-11-15 23:59:34
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fwks3518

木虫 (正式写手)


狼狼晴空(金币+1,VIP+0):可以试试看。谢谢哦。 11-16 18:18
狼狼晴空(金币+1): 2010-03-06 20:17
先不要扔培养瓶,继续在培养箱放置一段时间,有时候也能恢复过来的。
可能的原因除了上面所说的支原体感染之外,可能跟冻存时细胞活力太低有关,建议复苏时加大FBS含量到20%试试,并加入双抗,24小时后观察、换液。
4楼2009-11-16 12:32:46
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qqsvery

木虫 (著名写手)


狼狼晴空(金币+1,VIP+0):支原体检测看来很麻烦。不如去弄新细胞比较方便吧呵呵。 11-16 18:19
你这个照片拍的不是很清晰,不过看上去真的有点像是污染了,支原体污染检测你可以看看这个:

http://www.bioon.com/experiment/showarticle.asp?articleid=80858(有图参照)
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
5楼2009-11-16 13:45:00
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