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寡核苷酸合成仪“抽风”，结果出来一串乱码
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上周做一条25bp的引物，设定好了序列，寡核苷酸合成仪哐当哐当跑了一下午。收样送去质谱，结果出来我傻了——分子量对不上，差了整整300多。 一开始怀疑是单体加错了，翻记录，没毛病。又怀疑是试剂过期，查批号，还有半年效期。折腾两天找不到原因，气得把合成日志翻出来一条条对。 结果发现一个诡异的地方：程序记录显示第12个循环的“脱保护”步骤多停了5分钟。就这5分钟，导致那个位置的碱基脱落了一部分，后面的延伸全乱套了。 打电话问工程师，人家说可能是氮气压力波动导致阀门延迟。这玩意儿平时根本注意不到，谁能想到气源还能影响合成序列。 后来学乖了，每次启动寡核苷酸合成仪前先看气源压力，跑的过程中隔几个小时瞄一眼实时日志。还有寡核苷酸合成用的乙腈，以前觉得差不多就行，现在老老实实加分子筛脱水，稍微有点水分就换新的。 搞寡核苷酸合成这活儿，仪器再智能，该盯的细节一个都不能少。有时候出问题不是大事，就是那些没人提醒过的小地方在作妖。 有人遇到过类似的“莫名其妙”的合成失败吗？最后怎么找到原因的？ |
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