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新虫 (初入文坛)

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[交流] 【经验分享】大鼠骨组织脱钙切片经验交流

最近帮几位同学做了批大鼠骨组织切片（股骨、膝关节），发现很多人在脱钙这步容易出问题，要么脱不净切不动，要么脱过头导致组织结构破坏、染色模糊。分享几点我们的处理经验，欢迎大家交流指正：

1. 脱钙液怎么选？

· 酸性脱钙液（如10%甲酸）：速度快，1-3天可完成，但对组织损伤较大，后续做免疫组化（IHC）可能影响抗原性，适合只做HE染色的样本。
· EDTA脱钙液：速度慢（2-4周），但能较好保留抗原和形态结构，适合需要做Masson、天狼星红或免疫组化的样本。

我们日常经验：如果做骨关节炎（OA）模型要染番红O固绿，建议用EDTA慢脱，软骨结构会更完整。

2. 如何判断脱钙终点？

脱钙不够切不动，脱钙过头组织变软发糟。我们常用的判断方法：

· 针刺法：用针轻刺骨组织，感觉像刺硬奶酪（稍有阻力但能刺入）即可终止。
· X光法（有条件的话）：拍片看骨组织影像是否消失，最准确。
· 化学法：测脱钙液钙离子浓度，但平时用得少。

3. 切片不脱片的小技巧

骨组织含钙，切片时容易掉片。我们试下来最管用的是：

· 多聚赖氨酸或防脱玻片（必备）
· 烤片温度：60℃烤2小时以上，过夜更保险
· 捞片水温：42℃左右，水温太高容易导致组织离散
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1楼 2026-02-24 11:28:13

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