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科研战神来了新虫 (小有名气)
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[交流]
一张图搞懂qPCR实验中CT值的定义
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1先看懂qPCR扩增曲线的一生这是 qPCR 扩增的全过程，分 3 个阶段：1. 起始期：刚开始循环，DNA 刚复制，荧光信号弱，和背景噪音差不多，仪器检测不到明显变化；2. 指数期：DNA 片段以 2ⁿ的速度快速复制，荧光信号呈指数增长，这个阶段的扩增效率最稳定，是最能反映模板初始量的阶段；3. 平台期：原料耗尽，扩增减速，荧光信号不再增加，曲线趋于平缓。2CT 值CT 值：“荧光达标” 时的循环数。上图中那条灰色的阈值线（Threshold），是仪器设定的可检测荧光信号阈值。CT 值（Cycle Threshold），就是荧光信号刚好跨过这条门槛时，PCR 已经跑了多少个循环。绿色曲线：在更早的循环就达标 → CT 值更小（说明它的初始量多，只需要跑几圈就到阈值线） 红色曲线：需要更多循环才能达标 → CT 值更大（说明它初始含量低，需要多跑几圈才能到阈值线）。3CT 越小，初始基因越多qPCR 的定量原理很直接：如果样品里的目标基因初始含量越高，DNA 复制到 “能被检测到” 的速度就越快，对应的 CT 值就越小；反之，初始含量越低，CT 值就越大。比如 过表达（OE）组的 CT 值 < 对照组 → 说明目标基因表达量更高敲低（KD）组的 CT 值 > 对照组 → 说明目标基因表达量更低。 |
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