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科研战神来了新虫 (小有名气)
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ELISA、WB、IHC实验技术的 区别与选择攻略
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ELISA（酶联免疫吸附试验）运用免疫学原理与化学反应显色的方法，将抗原或者抗体固定在酶标板的微孔中，再加入待检测的样本（通常是血清、血浆、组织或细胞培养上清等），样本中的目标蛋白会与载体上的分子特异性结合；再加入酶标记的二抗，形成“抗原-抗体-酶标记物”复合物；最后加入底物，酶会催化底物产生显色反应，通过酶标仪检测吸光度值，进而计算出目标蛋白的浓度。ELISA实验全程在液体体系+固相载体中完成，无需复杂的分离、切片操作，可以实现精准定量。 WB实验（蛋白免疫印迹）WB实验是基于分子量分离蛋白以及膜上特异性检测，当我们制备好样本后，首先需要利用SDS-PAGE电泳（按分子量分离蛋白），再使用电转仪把已分离开的蛋白质样品转移至固相载体（NC膜或PVDF膜等），最后利用抗原-抗体-标记物显色的方式进行显色反应，通过曝光得到的条带，判断目标蛋白是否存在，同时可通过条带的位置验证蛋白分子量，通过条带灰度半定量分析蛋白表达量。 WB实验（蛋白免疫印迹）免疫组化利用了免疫学原理与组织学技术，通过将新鲜组织或石蜡包埋组织制作成切片，经过脱蜡、抗原修复、封闭等处理后，在样本中加入一抗，与组织中的目标蛋白特异性结合，再加入荧光标记的二抗或者酶标记的二抗，再通过显微镜观察，可以清晰的观察到目标蛋白在组织或细胞中的具体分布位置（如细胞膜、细胞质、细胞核等）。，加入一抗与组织中的目标蛋白结合，再加入荧光标记或酶标记的二抗，最后通过荧光显微镜或显色反应（如DAB显色），观察目标蛋白在组织或细胞中的具体分布位置（如细胞膜、细胞质、细胞核等）。 总结：免疫组化能够对目标蛋白进行精准的定位，是定位研究的首选实验手段；WB实验的定量相较于IHC更精准，即使我们可以通过提取细胞和蛋白，膜蛋白，胞浆蛋白来检测目标蛋白的含量从而间接证明目标蛋白的定位，但是其灵敏度远低于IHC实验；ELISA实验是三种实验手段中定量最准确的，是检测分泌蛋白的首选。 |
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