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WB实验必看：一抗来源如何决定二抗种属？
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WB 实验中，一抗种类繁多（针对不同目的蛋白），但二抗常用的仅抗兔、抗鼠两种，核心遵循 “一抗来源决定二抗种属” 的选择原则，原因如下： 一、抗体结构基础 抗体呈 “Y” 字形，分为两部分： 1. 可变区（Fab 段）：“Y” 的顶端，负责特异性结合目的蛋白，不同抗体的 Fab 段不同，决定了抗体识别蛋白的专一性； 2. 恒定区（Fc 段）：“Y” 的主干，序列由物种决定，同一物种（如兔、鼠）所有 IgG 抗体的 Fc 段几乎完全一致，是区分抗体来源种属的 “身份标识”，不同物种的 Fc 段差异显著。 二、二抗的作用 二抗不直接结合目的蛋白，核心功能是 “信号放大”：它特异性结合一抗的 Fc 段，同时携带 HRP、AP 等显影标签，通过标签催化化学发光反应，让一抗（及结合的目的蛋白）形成可见条带，是 WB 显影的关键桥梁。 三、“一抗来源决定二抗种属” 的原理 1. 二抗是定向制备的：抗兔二抗由兔免疫球蛋白（含兔源抗体 Fc 段）免疫其他动物（如山羊）制成，专门识别兔源一抗的 Fc 段；抗鼠二抗同理，由鼠免疫球蛋白免疫制备，仅识别鼠源一抗的 Fc 段； 2. 结合具有特异性：二抗经过筛选，仅能识别对应物种一抗的 Fc 段，无法跨物种结合（如抗兔二抗不能识别鼠源一抗的 Fc 段）。 |
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