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老师，我现在需要做大麦BSMV-VIGS试验，在设计引物的时...
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老师，我现在需要做大麦BSMV-VIGS试验，在设计引物的时候，我选用了多个片段但是特异性不是唯一，后续选用3‘UTR区域进行设计引物，选用250bp作为我的沉默片段，经过ncbi blast特异性，以及用primer测了发夹结构，唯一特异性以及0发夹结构，一对引物Tm在55，56但是我在扩增的时候我从51到59设置的温度梯度，以cdna作为模板怎么扩都扩不出来，为了验证不是cdna的问题，我又用管家基因验证，出现正确条带，排除cdna的问题，我想问问各位大佬，3’Utr区域扩增是否有什么注意事项? @youlinglyw 发自小木虫IOS客户端 |
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