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求助,3’utr区扩增
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求助各位大佬,我是一名农学类分子生物学研究生新生,我现在需要做大麦BSMV-VIGS试验,在设计引物的时候,我选用了多个片段但是特异性不是唯一,后续选用3‘UTR区域进行设计引物,选用250bp作为我的沉默片段,经过ncbi blast特异性,以及用primer测了发夹结构,唯一特异性以及0发夹结构,一对引物Tm在55,56但是我在扩增的时候我从51到59设置的温度梯度,以cdna作为模板怎么扩都扩不出来,为了验证不是cdna的问题,我又用管家基因验证,出现正确条带,排除cdna的问题,我想问问各位大佬,3’Utr区域扩增是否有什么注意事项? @biostar2009 @wizardfan @youlinglyw @飞约疯人院 发自小木虫IOS客户端 |
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