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科研战神来了新虫 (小有名气)
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细胞培养血清怎么选择？胎牛血清/新生牛血清/小牛血清的区别与选择指南
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| 在实验过程中，我们经常听到胎牛血清，小牛血清，新生牛血清等，它们有什么区别，在实验过程中如何选择呢？1血清的作用①提供营养物质：血清中含有氨基酸、维生素、矿物质等基础营养，以及 IGF、EGF 等生长因子，是细胞增殖必不可少的成分②对于贴壁细胞而言，血清中含纤维连接蛋白、层粘连蛋白等，能够帮助贴壁细胞附着生长。③含有白蛋白等成分，能够维持培养基渗透压和 pH 稳定，保护细胞免受机械损伤。2不同血清的区别与选择胎牛血清、小牛血清和新生牛血清之间的核心区别在于采血来源的牛龄、成分组成以及采血方式①胎牛血清：采血对象是未出生的胎牛，通过无菌心脏穿刺采集，胎牛从未接触外界环境，未进食过母乳或饲料。牛龄通常在妊娠 3~8 个月，它的抗体、补体等有害成分最少，生长因子含量最丰富，适合干细胞、淋巴细胞等对营养要求高的细胞。②新生牛血清：来自出生 10 日内未哺乳的小牛，成分稳定性中等，适合普通肿瘤细胞、成纤维细胞等常规培养。③小牛血清：采血对象是出生后数周至 6 个月的小牛，已经采食母乳和饲料，消化系统和免疫系统已初步发育。抗体补体含量较高，营养成分相对单一，适合对血清要求不高的基础实验。血清的选择原则：实验要求越高，越优先选胎牛血清；常规细胞培养可根据预算选新生牛血清及小牛血清。3相关小问题①细胞培养的时候，血清含量越高越好吗？细胞培养时血清含量并不是越高越好的，需要根据细胞类型和实验目的进行调整：常规传代细胞如HEK293、Hela一般添加 10% 血清即可，原代或干细胞等难培养的细胞可提升至 15%~20%，过高浓度血清不仅会增加成本、还可能因抑制因子累积、诱导细胞分化或表型改变，以及降低营养气体交换效率，最终抑制细胞增殖甚至引发老化。②血清在使用之前需要灭活吗？血清的灭活一般是（56℃水浴 30 分钟），其主要的作用是破坏血清中的补体系统（补体是血清中一组具有细胞毒性的蛋白复合物，如果没有灭活，补体可能与细胞表面的抗体结合，引发补体介导的细胞裂解，导致细胞死亡或生长状态变差。），但是灭活的同时会导致部分生长因子流失、沉淀增多，对多数细胞培养没有明显优势。血清不是必须灭活才能使用，是否需要灭活取决于细胞类型和实验目的，常规细胞培养无需灭活；如果是免疫相关细胞、敏感细胞，可尝试灭活（56℃水浴 30 分钟），并对比灭活前后的细胞生长状态。③血清不能反复冻融血清不能反复冻融，反复低温 - 室温循环会导致血清中的蛋白（如白蛋白、生长因子）变性、沉淀，破坏补体系统和营养成分，最终降低血清活性。因此当我们收到血清后，应该立即分装到50mL离心管中，注意50mL离心管不能装满50mL血清，装入40mL即可。 |
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