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二马宇飞

新虫 (初入文坛)

我认为如果其他的原因都排除了,是不是你的蛋白沉淀剂选择的不对啊,换一种蛋白沉淀剂试一试呢
11楼2009-11-12 20:28:26
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

谢谢楼上的,我用空白血浆+样品,经过沉淀蛋白、离心等前处理步骤以后,发现还是能检测出来的,说明我的提取方法应该没错。
另外我加的是100ul的样品,最后用50uL甲醇复溶,取20ul进HPLC。假设原样品浓度是Cs,那么用50ul复溶后,浓度变为2Cs,,取20ul进样,那么量就是40Cs;原来的100ul样品我也进样20ul,量就是20Cs,我发现经过血浆预处理后,本来样品应该是体外2倍的峰面积(40Cs=2X20Cs)真正检测的时候只有原来的1/8,综合里里外外,即经过血浆预处理后,只能萃取出原来的1/16.这样的萃取方法正常吗?
12楼2009-11-14 22:37:36
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

另外我还发现在我血浆取血点取出来的血浆样品,还是能检测出来一点,但是就是量很少,几乎刚刚能到定量限。这样的情况是常见还是什么?我给药量很大了,100mg/kg。
      而且在空白血浆里在样品相同的出峰位置还有其他的微量黄酮类成分(量刚过检测限)干扰,难道大鼠的空白血浆里也有黄酮类物质?
13楼2009-11-14 22:43:17
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nonphar819

木虫 (小有名气)

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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 11-22 14:59
该物质既然微溶于甲醇,你在沉淀完蛋白后,上清液应该还有很多甲醇吧。我觉得应该是甲醇使得萃取回收率降低了。你最好在做空白血浆加样品时,计算一下萃取回收率,能检测到不代表就能用,回收率低也是一个大问题。考虑换个蛋白沉淀剂试试。
14楼2009-11-22 09:19:12
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猛虎216

金虫 (小有名气)

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karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢发言! 1-3 13:01
可以试试换其他有机溶剂沉淀蛋白,甲醇沉淀蛋白时也许会把你要的成分沉淀掉
15楼2009-11-22 15:14:22
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cts129

铁虫 (初入文坛)


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能不能把你的前处理过程发到我邮箱,我也正做这个,我们相互交流交流,邮箱是:cts129@163.com
16楼2009-11-30 16:50:55
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cuipingzh

金虫 (小有名气)

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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 12-4 01:09
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2009-11-12 10:08:
不用空气流吹干样品没关系吧?顺便问一下用空气流吹干样品有什么用?

浓缩样品,提高药物的浓度。
17楼2009-12-02 16:53:59
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sylgh4923

铜虫 (正式写手)

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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 12-4 01:09
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2009-11-11 22:45:



1 这是第2次做了,第1次做的时候给药剂量我感觉低,所以这次加大5倍的给药剂量,应该不是给药剂量问题。
2.取血时间我采了12个点,可是每个点都没有。
3.如果是3的情况,不以原型入血的话,那血里应该检测出它 ...

你做过空白血浆加药的样品吗,如果空白血浆加药的样品能做出来,那就是不以原型药物入血,或者入血量极少。
18楼2009-12-03 22:30:32
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ccbright1016

金虫 (正式写手)


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主要在代谢、血液处理上应该有问题
19楼2009-12-04 09:14:21
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zdm7106

金虫 (小有名气)

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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 1-3 13:02
方法学验证你做了没有,应该考察下看萃取方法是不是可行的。回收率怎么样
大地无垠
20楼2010-01-03 10:59:32
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