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[交流] 如何判断哪种失活?

如何判断是哪种失活?
1. 分析型HPLC:
   · 如果主峰消失或变小,出现更早洗脱的峰(可能是水解片段),说明发生了化学降解(水解)。
   · 如果主峰变小或消失,在进样峰或死体积处出现大峰(不保留物质),或在色谱图末端出现聚集峰,说明发生了物理聚集。
   · 如果主峰保留时间发生偏移(通常是提前),旁边出现肩峰或新峰,很可能是发生了脱酰胺(增加负电荷,使其更亲水)。
2. 质谱:
   · 分子量增加16Da → 氧化。
   · 分子量增加1Da或17Da → 脱酰胺(Asn→Asp +1Da,或进一步酸化)。
   · 分子量减少18Da → 环化(如天冬酰胺酰亚胺形成)。
   · 出现多个小分子量杂峰 → 肽键水解断裂。

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