Co-IP技术核心要点汇总，蛋白互作研究高效避坑 - 分子生物 - 生物信息

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一、技术核心

Co-IP依托抗原-抗体特异性结合，可精准捕获目标蛋白及互作蛋白，实现高效鉴定，核心步骤分三步：①特异性抗体结合靶蛋白形成免疫复合物；②互作蛋白随复合物共沉淀；③离心分离后经WB、质谱完成定性检测。

二、核心优势

1.?近生理条件实验，保障蛋白天然构象与复合物完整性；
2.?适配内源性蛋白研究，无需人工修饰或标记；
3.?应用场景广，覆盖信号转导、病毒-宿主互作等多研究领域。

三、实验逻辑与结果判读

1. 实验原理

以蛋白A（靶蛋白）与蛋白B（候选互作蛋白）为例，用Anti-A抗体与细胞裂解液孵育形成复合物，加入磁珠富集三元复合物，洗涤去杂后WB检测，双条带即证实互作。

2. 结果判定

- 阳性对照（Input组）：总蛋白样本，必现A、B蛋白条带，验证样本有效性；
- 阴性对照（IgG组）：无目标条带，排除非特异性结合干扰；
- 实验样本：Anti-A沉淀后显双条带，确认蛋白互作成立。

四、条带缺失排查

1.?蛋白浓度低：优先用高浓度裂解液，避免过度稀释；
2.?抗体不适配：选用验证过的IP级抗体，表位不明优先多克隆抗体；
3.?体系配比错：常规100μg总蛋白搭配3μg抗体+30μl磁珠，按需优化；
4.?细胞量不足：用≥145mm培养皿，细胞融合度≥50%；
5.?裂解不充分：适度提高裂解液离子强度，可加≤0.1% SDS增强变性。

五、实验成功关键

1.?选用经验证的高质量IP级抗体；
2.?优化体系，保证足量细胞、适宜蛋白浓度及精准配比；
3.?提升裂解效率，确保蛋白复合物充分释放。