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【求助】western Blot实验问题【有效期至09年12月5日】
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我的样品是大肠杆菌表达的“中华绒螯蟹的基因”的蛋白，目的蛋白带有His标签，用的5%的脱脂奶粉 孵育4度过夜，用PBST配制的1：1000（推荐浓度）的Merck公司抗组氨酸标签的单克隆一抗（鼠源），室温孵育2小时，PBST配制的1：500（推荐1：200--500）的天根公司的 羊抗小鼠的HRP二抗，室温孵育2小时，DAB试剂盒染色。洗涤均为-----ＰＢＳＴ洗涤５ｍｉｎ×５次。 设置的二抗对照（不加一抗）条带竟然和正常（加一抗和二抗）的条带是一样的！结果条带非常清晰，但有很多杂条带，原因是什么？ 问题1：一抗推荐使用 Goat Anti-Mouse IgG，翻译成中文应当是羊抗小鼠的IgG吧？有山羊抗小鼠的抗体吗？ 问题2：一抗、二抗有什么问题吗？是不是还需要稀释呀 ？ 问题3：有什么方法可以解决二抗对照也有条带的问题吗？ 万分感谢！ |
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