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揭秘WB实验内参抗体的秘密
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什么是内参抗体？它在WB实验中有什么作用？ 简单来说，内参抗体就是我们实验中的"小助手"，它专门用来检测那些在各种细胞或组织中表达量比较稳定的蛋白质（称为内参蛋白或管家蛋白）。这些蛋白质通常不会因为我们的实验处理而发生太大变化，所以可以作为一个参照物！ 为什么内参抗体如此重要？ 样品加载量校正 ——不管我们多么小心，每个加样孔中的总蛋白量总会有些许差异。内参就像是一个"天平"，帮我们校正这些差异！⚖️ 实验操作误差补偿 ——从提取蛋白到最后显影，每一步都可能有操作误差。内参可以帮我们"平衡"这些误差，就像是给实验上了一份"保险"！🛡️ 不同样本间的标准化比较 ——当我们需要比较不同处理组之间的蛋白表达变化时，内参就是那把"标尺"，让所有数据都在同一起跑线上公平比较！🏁 不用内参或选择不当会怎样？ 假阳性结果 ——你可能会误以为目标蛋白表达上调了，实际上只是那组样品加载量更多！ 假阴性结果 ——反之，可能会错过真正的表达变化，以为没效果！ 数据不可重复 ——没有内参，实验结果就像"浮云"，今天一个样，明天又是另一个样，根本没法重复验证！ 论文投稿被拒 ——现在几乎所有期刊都要求WB实验必须有内参对照，不然审稿人分分钟教你做人！ 常见的内参蛋白有哪些？ β-actin（β-肌动蛋白） 体积适中（42kDa），是细胞骨架的重要组成部分。就像每个家庭都需要"顶梁柱"一样，几乎所有细胞都表达β-actin！使用率最高的内参之一～ GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶） 分子量约37kDa，参与糖酵解过程。就像城市中无处不在的便利店，GAPDH在大多数细胞中都很稳定且丰富！超级常用！ α-Tubulin（α-微管蛋白） 约50kDa，是微管的主要成分。如果把细胞比作一座城市，微管就是城市中的"高速公路"，稳定且必不可少！ HPRT（次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶） 较小的内参（约25kDa），适合检测小分子量目标蛋白时使用，避免信号重叠。就像是"迷你版"的参照标准～ Lamin B（层粘连蛋白B） 核内膜蛋白（约67kDa），特别适合核蛋白实验的内参。就像是细胞核的"围墙"，表达相当稳定！ 毕合生物(www.bihebio.com)提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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