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[交流]
给细胞来点"颜色"瞧瞧
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1 胸腺嘧啶类似物（EdU） EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，可以理解为它会cosplay——核苷酸，在S期被傻傻分不清的细胞主动掺入到新合成的DNA链中。 EdU是BrdU法的升级版。将荧光标记（如FITC、Cy3、Cy5等）与EdU的炔基共价结合，在DNA合成时，EdU掺入，新合成的DNA就获得了荧光标记，我们就可以根据荧光强度判定新合成了多少DNA。 这一染料常用于细胞增殖检测，使用免疫荧光或流式细胞术检测荧光强度。可与其它免疫荧光标记联用，进行多色标记。 其优点在于： 高灵敏度与特异性：只标记正在合成DNA的细胞，单细胞分辨率。 不破坏 DNA 结构，兼容其它检测，荧光外挂灵活：与BrdU（需要DNA酸变性或酶消化以暴露抗原）相比，EdU化学反应不会破坏DNA结构，对样品几乎无损。 因此允许与其它多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。 由于在EdU法中，荧光是由另外的荧光标记提供的，可以根据已确定的其它待测标志物，为EdU选择一个在光谱上不冲突的通道。 2 小沟结合剂（Hoechst 系列, DAPI） Hoechst 33342和 Hoechst 33258 Hoechst 33342和Hoechst 33258是最常用的两种，前者细胞膜通透性更强、细胞毒性较小，通常活细胞染色建议使用前者，固定细胞染色使用后者。Hoechst是一类小沟结合剂，与DNA的A-T富集区特异性结合。 由于是核染料，可用于检测早期凋亡，染色后可以直接用荧光显微镜或流式细胞仪检测荧光。 DAPI DAPI与Hoechst类似，也是小沟结合剂，优先结合A-T富集区。但DAPI是死活染料，不能透过活细胞的细胞膜，主要用于固定后的细胞或组织染色。 DAPI与双链DNA结合后产生的荧光强于与单链DNA结合所产生的荧光。相比Hoechst荧光更稳定，不易淬灭，但亮度低一些。 DAPI最核心的应用，就是在免疫荧光中用于核复染，或流式分析细胞周期。且与红绿色通道分离度好，适合多色荧光搭配。 3 嵌入式染料（PI, 7-AAD, SYTOX等） PI PI也是经典的死活染料，常用于流式细胞周期分析，AnnexinV/PI双染是流式的基础实验之一。 PI是一类嵌入式染料，嵌入到核酸双链之中。由于不能透过完整的细胞膜，所以只能标记死细胞或晚期凋亡细胞。 7-AAD 与PI类似，也是不能透过活细胞膜的嵌入式死活染料。它的发射光谱比PI更远，更容易与FITC等常用染料搭配进行多色分析。 SYTOX 这是一种用于染死细胞核的染料。不能透过活细胞膜。一旦进入死细胞与DNA结合，荧光将大幅增强。有极高的灵敏度，适用于需要极高的死细胞标记场合。 毕合生物(www.bihebio.com)提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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