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根据细胞密度,判断适合做什么实验❓
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不同的细胞密度,适合做的实验都不一样 🌟贴壁细胞90~100%密度: 基本做不了什么实验,只适合传代or冻存,或者细胞转染后长满了然后收细胞检测 🌟贴壁细胞70~80%密度: 细胞处于快速生长期💨,此时适合做转染,或者提蛋白、RNA,也适合加药处理等等… 贴壁细胞转染密度过大会导致转染效率下降,密度过小会影响细胞状态,70~80%刚刚好 🌟贴壁细胞30~40%密度: 适合做慢病毒感染,不适合做转染或加药等实验,病毒感染最好用低密度,感染完毕直接换液等细胞生长即可,后续可筛选或检测感染效果 🔝贴壁细胞如何提高转染效率? 1、细胞在70~80%转染 2、选择状态很好的细胞,蛋白表达会更好,且转染至少36h。 3、转染前可饥饿处理几小时,但是这样有细胞状态变差的风险,只适用于部分蛋白的转染。 悬浮细胞做实验通用密度:100万/ml 🌟悬浮细胞30~40%密度 同样适合慢病毒感染,悬浮细胞感染难度比贴壁大很多,且细胞没贴壁那么耐糙,因此感染时可以先测一个MOI和滴度再做❗️具体测定方法之前发过哦~ 🌟悬浮细胞90~100%密度 同样适合冻存、传代细胞,或动物实验 ✅悬浮细胞尽可能保证其密度足够的生长,不要频繁传代,可能影响细胞状态,因为有一部分悬浮细胞,稀疏长得很差,密度大反而越长越好,这是和贴壁不太一样的地方。 ✅细胞状态佳的话,可直接传代不用离心,除非培养基黄了再离心换液,直接把一皿的细胞1分为2,然后往2个皿中补新的培养基即可 |
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