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cyl-250368新虫 (著名写手)
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[求助]
GPC3克隆
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HepG2是GPC3高表达阳性细胞，我提取了Total RNA （已跑胶验证其质量没问题）并逆转录成cDNA，已cDNA为模板，用设计好的引物去进行克隆（GPC3完整序列从NCBI上获取，引物从其首尾设计，已进行特异性验证），克隆出来片段大小只有1000bp左右（降低过循环数，退火温度也设过梯度，但出来的条带大小始终在同一个位置），将其连在质粒上送去测序，发现只有正确序列的前350bp和后450bp(中间还有100+bp不属于GPC3序列)，我分析觉得是转录本不对，但我老师说你说不对就不对啊，有没有哪位大佬帮我分析一下，或者有没有大佬克隆过该序列，帮帮宝宝吧（被老师骂哭了） @youlinglyw @biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫手机客户端 |
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