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[交流] 【模型攻略】揭秘多发性硬化的幕后推手!

导语:你是否听说过“多发性硬化(Multiple sclerosis ,MS)”?这是一种被称为“不死癌症”的神经系统疾病,患者可能是突然视物模糊的年轻人,或是莫名行走困难的壮年。全球有数百万患者正与之抗争,但病因至今成谜。科学家们如何研究这种复杂的疾病?答案可能藏在一只小小的实验鼠身上。在所有为复制MS而开发的模型中,实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 最能反映MS的自身免疫发病机制。通过一种名为EAE的模型,他们得以在实验室里“复现”这场疾病,并寻找攻克它的钥匙。今天,就让我们走进这场精彩的科学侦探故事。
实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)作为多发性硬化(MS)的动物模型,其构建过程中实验动物的选择至关重要。不同的物种、品系、年龄和性别都会影响模型的成功率和实验结果的可重复性。以下从多个方面详细分析EAE模型的构建。PART  01物种/品系/试剂选择
物种选择EAE模型最常用的实验动物是啮齿类动物,尤其是大、小鼠。这类动物因其成本低、繁殖快、易于操作且免疫系统与人类有一定相似性,成为EAE研究的主流选择。此外,啮齿类动物的EAE模型能够较好地模拟MS的自身免疫病理特征,为研究MS的发病机制和药物筛选提供了重要平台。品系选择不同品系的动物对EAE的易感性存在显著差异。✔ C57BL/6小鼠:常用的EAE模型动物,因其对髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)诱导的EAE具有高度敏感性。✔ Lewis大鼠:常用的模型动物,尤其适用于研究维生素等营养物质对EAE的影响。✔ Wistar大鼠:因其稳定的免疫反应和易于操作的特点,常用于T细胞疫苗的研究。年龄和性别✔ 年龄:年轻动物(通常为6-8周龄)因其免疫系统较为活跃,更易诱导EAE模型。✔ 性别:性别差异在EAE模型中也有显著影响。例如,雌性动物在某些研究中表现出更高的发病率和更严重的症状,这可能与激素水平和免疫反应的性别差异有关。试剂选择✔ 抗原选择:常用的抗原包括髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG35-55)、髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP)和髓鞘碱性蛋白(MBP)。其中,MOG35-55是C57BL/6J小鼠诱导EAE的常用抗原。✔ 佐剂:完全福氏佐剂(CFA)是EAE诱导中的常用佐剂,用于增强免疫反应。✔ 百日咳毒素(PTx):用于增强EAE的诱导效果,但其剂量和批次效价需严格控制,以确保模型的一致性。
PART  02免疫操作
01抗原乳化将抗原(如MOG35-55)与CFA按比例混合,制备成乳剂。通常,抗原浓度为1-2 mg/mL,CFA与抗原的体积比为1:1。02免疫注射将乳化后的抗原注射到动物背部皮下或尾根部。通常采用多点注射,每点注射50-100 µL,总剂量为100-200 µg/只。03PTx注射在免疫当天和免疫后48小时,分别注射PTx(200-500 ng/只,腹腔注射)。PTx的剂量需根据批次效价调整,以确保模型的一致性。
PART  03模型评估
01临床评分从免疫后第7天开始,每天观察动物的临床症状,并按照标准评分系统进行评分。评分标准通常包括体重变化、尾部张力、后肢无力、前肢无力和瘫痪等。
02病理学检测在发病高峰期(通常为免疫后第16-20天)处死动物,取脑和脊髓组织进行病理学分析。常用染色方法包括H&E染色(观察炎症细胞浸润)和罗克沙尔坚牢蓝染色(观察脱髓鞘情况)。
03免疫学检测通过流式细胞术或ELISA检测外周血或中枢神经系统中的免疫细胞(如Th17细胞和Treg细胞)及其相关细胞因子(如IL-17和IL-10)。

【模型攻略】揭秘多发性硬化的幕后推手!


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