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毕合生物2024

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[交流] 缓冲液选择指南：实验成功的关键决策

缓冲液的基础知识：TBS、TBST、PBS、PBST的成分与pH值差异

实验又翻车了？背景一片黑？条带弱到看不见？可能是你的缓冲液没选对哦！作为实验室的"幕后英雄"，缓冲液的选择直接关系到你实验成败的命运线～今天就让我来带大家全面认识实验室中最常用的四种"液体宝藏"：TBS、TBST、PBS和PBST！

四大缓冲液家族成员介绍

TBS(Tris缓冲盐溶液)

TBS是由Tris碱和氯化钠组成的温和缓冲系统。Tris全名Tris(羟甲基)氨基甲烷，是实验室里的pH调节利器！TBS通常在pH 7.4-7.6之间工作，略微偏碱性，这对许多生物分子尤其是蛋白质超级友好哦～

1×TBS配方:

Tris: 50 mM (约6.05 g/L)

NaCl: 150 mM (约8.76 g/L)

用HCl调pH至7.4-7.6

TBST(含吐温的Tris缓冲盐溶液)

TBST就是TBS的升级版！在TBS基础上添加了一点点Tween-20（俗称"吐温"）。这个小小的表面活性剂就像是缓冲液界的"洗洁精"，能有效减少非特异性结合，让你的Western blot背景干净得不要不要的～

1×TBST配方:

在1×TBS基础上

Tween-20: 0.05%-0.1% (约0.5-1 mL/L)

PBS(磷酸盐缓冲盐溶液)

PBS是由磷酸盐和氯化钠组成的经典缓冲系统，pH通常在7.2-7.4之间，比TBS稍微酸一点点。PBS的渗透压和离子强度与人体体液相似，所以它对细胞特别友好，是细胞培养和组织处理的绝佳选择！

1×PBS配方:

Na₂HPO₄: 10 mM (约1.42 g/L)

KH₂PO₄: 1.8 mM (约0.24 g/L)

NaCl: 137 mM (约8.0 g/L)

KCl: 2.7 mM (约0.2 g/L)

pH值应在7.2-7.4之间

PBST(含吐温的磷酸盐缓冲盐溶液)

和TBST类似，PBST就是给PBS加上了Tween-20，增强了清洗能力。这个组合在免疫实验中特别受欢迎，能有效减少背景干扰，让你的实验结果又清晰又漂亮！

1×PBST配方:

在1×PBS基础上

Tween-20: 0.05%-0.1% (约0.5-1 mL/L)

pH值差异的重要意义

TBS系(pH 7.4-7.6)和PBS系(pH 7.2-7.4)之间看似微小的pH差异，实际上对某些实验影响可大了！

TBS略微偏碱，这对碱性磷酸酶(AP)等酶活性有利，所以在Western blot中使用AP标记的二抗时，TBS系统是更好的选择。而且，TBS中的Tris能与许多重金属离子形成络合物，减少这些离子对蛋白质活性的干扰。

PBS略微偏酸，更接近人体生理环境，对活细胞和组织切片特别友好。另外，PBS在高温下更稳定，不易发生pH漂移，所以需要高温处理的实验更适合用PBS系统。

实用小贴士

小贴士1：关于储存条件和保质期

TBS/TBST：室温可存放2周，4℃可存放1个月

PBS/PBST：室温可存放1个月，4℃可存放3个月

小技巧：可配制10×浓缩液长期保存，用时稀释，但注意TBST/PBST中的Tween-20应该在使用前新鲜添加，不建议长期储存含Tween的溶液！

小贴士2：避免常见配置错误

Tween-20是粘稠液体，加入时要缓慢搅拌避免产生大量泡沫

TBS配制时，先溶解Tris再加NaCl，最后调pH

PBS配制时，如果直接用磷酸二氢钾和磷酸氢二钠粉末，一定注意按比例称量以获得正确pH值

所有缓冲液最好用超纯水配制，普通蒸馏水可能含有影响实验的杂质哦

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1楼2025-10-11 16:54:35

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