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慢病毒难以转染CAF如何改进实验方案
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半年前我用CRISPER质粒敲了CAF的目的基因，现在因为CAF老化需要重新构建稳系，但同样的protocol在新的CAF上不再起效了。用293t包出来的病毒液转染肿瘤细胞能够构出稳系，但同样滴度的病毒液处理同样时间（24h），换成完全培养基继续培养24h，再加入合适的puro（4μg/ml）浓度会导致细胞全部死亡，之前的稳系这个浓度完全没问题。细胞转染时的融合度大概70%左右（也和之前一样）。 请问哪里能够改进，已经卡在这里两个月了，真的很需要这个稳系QAQ。 |
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