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慢病毒难以转染CAF如何改进实验方案
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半年前我用CRISPER质粒敲了CAF的目的基因,现在因为CAF老化需要重新构建稳系,但同样的protocol在新的CAF上不再起效了。用293t包出来的病毒液转染肿瘤细胞能够构出稳系,但同样滴度的病毒液处理同样时间(24h),换成完全培养基继续培养24h,再加入合适的puro(4μg/ml)浓度会导致细胞全部死亡,之前的稳系这个浓度完全没问题。细胞转染时的融合度大概70%左右(也和之前一样)。 请问哪里能够改进,已经卡在这里两个月了,真的很需要这个稳系QAQ。 |
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