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多肽和载体蛋白的偶联 已有1人参与
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肽-载体蛋白衔接多用于制备抗毒素类抗体，单独的单个通常通常小小的不足以激起充分的免疫反应，而带有很多抗原表位的载体蛋白有利于刺激辅助性T细胞，进一步诱导B细胞免疫反应。合生生物偶联蛋白主要如下几种： KLH（Keyhole Limpet Hemocyanin），即血蓝蛋白，由于KLH比BSA有更高的免疫原性，因此是最常被替换的载体蛋白。 BSA（牛血清白蛋白），即牛血清白蛋白，属于最稳定的和可溶的白蛋白。BSA的不利之处在于在很多实验中，它被当作封闭剂使用，如果多肽-BSA偶联物的抗血清用于这样的检测分析中，通常会出现假阳性，因为这些血清含有抗BSA的抗体。 OVA（Ovalbumin），即鸡卵白蛋白，它可作为第二载体蛋白去验证抗体是否仅针对靶向而并非载体蛋白（如BSA）。对在动物体内产生免疫反应而言，大多数多肽的分子量都太小。将多肽与载体蛋白如KLH等偶联之后，不仅能增加抗原的大小，也能增强免疫性。我们可以提供与KLH,BSA和OVA蛋白的偶联。大多数客户选择与KLH交联，因为KLH的免疫性更好，而且BSA在很多实验中作为Blocking试剂，由于动物体内既会产生对多肽的抗体也会产生对载体蛋白的抗体，这样会出现假阳性。 KLH，BSA,OVA是分子量十分巨大的蛋白，有几百万Da，所以在其分子表面有大量的活性基团，最常用于偶联的是伯胺基团。小的多肽通常也带有不同基团可以用于偶联，常用的有伯胺基团，羧基和巯基。 多肽与KLH的偶联就是利用这些基团，再通过交联剂(crosslinker)，将多肽上的巯基/羧基/伯胺与KLH上的伯胺相连，从而形成共价偶联，制备成完全抗原，用于免疫动物获得抗体。所以偶联的伯胺应该是来自于赖氨酸侧链和N端，而偶联的羧基则来自于天冬氨酸，谷氨酸和C端，巯基则来自于半胱氨酸。至于偶联上去的数量，和加入的肽段，交联剂，KLH的摩尔比例有关。通常一分子KLH上可能会偶联上百个肽段。  |
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2楼2025-09-19 08:59:51
