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新虫 (初入文坛)

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[交流] ELISA实验为什么要严格按照说明书操作已有1人参与

市面上销售的ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）试剂盒，种类繁多，不同指标的检测范围及实验方法不尽相同，甚至相同指标不同厂家的试剂盒实验方法都可能会不一样。但基本原理都是一致的，是将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。

[斜眼R]每一个试剂盒里都会有对应的说明书，注意事项里大多都会提到“实验严格按照说明书的操作进行”。为什么要严格按照说明书操作？为了更完整的回答这个问题，需要先回顾一下ELISA各种方法的原理。
根据试剂的来源和标本的性状及检测的具体条件，可设计出不同类型的检测方法。大致分为以下几类：

Part 1：双抗体夹心法测抗原（见P2）
Part 2：双抗原夹心法测抗体（见P2）
Part 3：竞争法测抗原（见P3）
Part 4：间接法测抗体（见P3）

如果不按说明书操作可能会出现的不满意结果：

[一R]先说最严重的操作错误，看错或压根不看试剂盒配套说明书，不按操作步骤加样。比如把竞争法的试剂盒当作双抗体夹心法来做，导致的结果就是整板显示很强的蓝色，无任何梯度；

[二R]混用别的试剂盒里的试剂。不同厂家或者相同厂家的不同试剂盒，所含的试剂成分很可能是不一样的，混用导致的结果是，浪费珍贵的样本，样品的回收率达不到预期值，如果混用不同试剂盒的酶复合物，会导致显色过弱或过强，因为每种试剂盒所用酶复合物效价可能不一样；

[三R]不看文献或者不做预实验。比如某个试剂盒按照其灵敏度范围和文献报道推算样本应该1:10稀释，结果稀释成1:1000，导致的结果是显色过弱，结果不可用；

[四R]不校准移液器及培养箱的温度湿度。导致工作试剂浓度不准确，孵育温度不合适，实验带来误差；

[五R]洗涤不充分，每孔洗液加样过少，或者残留。导致的结果是显色过快，同时背景较高；

[六R]手工洗板时所用枪头没有悬空加入洗液，导致洗液污染，整个实验失败；

[七R]剩余酶标板条未及时放入干燥袋，导致酶标板受潮，下一次再做时，显色过弱或污染，CV值过高；

[八R]试剂盒保存条件不当。试剂盒要求放4℃的，放在了-20℃。或者要求放-20℃的，放在了4℃。均会导致试剂盒敏感性下降。

以上只是最常见的操作错误。顺利完成一次ELISA实验需要注意的细节很多，许多操作环节都影响到检测的质量。收到试剂盒还是要认认真真仔细研究说明书才行哦！

发自小木虫IOS客户端

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