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FANXIAOMEI

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】血样萃取出现的异常现象(急)

在处理血清时,采用水饱和的正丁醇萃取。100ul血清加入500ul正丁醇,涡旋,高速离心10min,发现溶液分了3层。上层为无色透明的溶液,中层为乳白色的絮状层,下层为淡红色透明溶液(血清略微有些溶血)。为何会出现中间层呢?难道是乳化了?
      取完上清液将溶液放入冷冻室,让其迅速冷冻,之后融化,涡旋,仍然有白色的絮状不溶物漂在溶液中上层。(产生乳化后改变其温度即可解决)难道这不是乳化?
      是否有人也做过正丁醇萃取血样,有遇到这种情况么?
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陈林霖

至尊木虫 (正式写手)

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472514568(金币+1,VIP+0):谢谢交流!欢迎再来! 11-10 13:14
没听说过用正丁醇萃血清的,个人感觉不是个好方法,改用沉淀蛋白法试试
2楼2009-11-10 10:23:37
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sdsmhill

新虫 (小有名气)

★ ★
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472514568(金币+1,VIP+0):给个红包奖励! 11-10 13:09
正丁醇萃?
需要这么大极性的?
涡旋时慢点试试,乳化很正常
另外,血浆冷冻后解冻也可能不明絮状物产生
3楼2009-11-10 10:42:46
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FANXIAOMEI

银虫 (小有名气)

我的分析对象极性比较强所以采用正丁醇萃取。不知那白色絮状物是否为沉淀出来的蛋白?
4楼2009-11-10 11:05:02
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zhao0919

金虫 (正式写手)

可否先沉淀蛋白
做不做是态度问题,做得好不好是能力问题,前者关系着做人,后者关系着做事!
5楼2009-11-10 14:26:34
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飞云

金虫 (正式写手)

最好不要用正丁醇,色谱检测时也会受影响吧?好像影响系统的。
中间层会不会是析出的蛋白呢?
6楼2009-11-10 16:11:29
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皇阿玛

铁杆木虫 (著名写手)

正丁醇的极性比较大,在萃取时会把血清中的杂质萃出来,一是会出现楼主所说的现象,二是检测时干扰大,建议换溶剂吧,祝你好运。
7楼2009-11-10 16:43:27
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bbb555151617

木虫 (小有名气)


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建议可以用乙酸乙酯  改用乙酸乙酯与正丁醇的混合溶剂 也许会有改善
8楼2009-11-10 19:36:16
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