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细胞能被慢病毒感染，但荧光很弱是什么原因
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慢病毒感染细胞后，由于目的基因与荧光蛋白表达的方式不一样，导致荧光表达有差异的情况也时有发生。细胞中荧光强度受病毒载体及细胞等因素影响。如出现荧光弱的情况，可以从以下5个方面排查： 1、融合荧光：目的基因与荧光蛋白融合表达，少数的目的基因对融合的荧光蛋白的荧光有影响。可能是目的基因表达量低，导致融合蛋白的表达量也低，进而荧光不亮；也可能是目的基因对荧光蛋白的结构和功能有影响，导致荧光不亮。 2、IRES连接：使用目的基因-IRES-荧光蛋白的结构，由于IRES下游基因表达偏弱，容易导致荧光弱。 3、2A连接：使用目的基因-2A-荧光蛋白结构，2A上游的目的基因和下游荧光蛋白在蛋白翻译时断开，如果上游目的基因表达量低，也会导致下游荧光蛋白表达受影响，导致荧光弱，此外，2A元件连接断开不完全，可能存在融合表达同样存在影响。 4、启动子影响：目的基因和荧光蛋白使用不同的启动子表达，荧光蛋白接在强启动子后面时荧光表达强，接在弱启动子后面时荧光表达较弱，同时，不同类型的启动子在不同细胞中启动效果也会有影响，某些细胞可能需要特殊的启动子启动荧光或者目的基因表达。 5、细胞增殖及观察时间：通常目的细胞感染的慢病毒颗粒数越多，细胞本身增殖越快，荧光会越强；慢病毒在增殖较快的细胞中感染96~120h后，荧光蛋白表达才达到峰值；在增殖较慢的细胞中感染后，荧光蛋白表达达到峰值需要更长的时间。 |
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