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科研战神来了新虫 (小有名气)
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[交流]
质粒，菌液，病毒的保存要点
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1质粒与大肠杆菌菌液的保存 在基因工程领域，质粒作为重要载体，可携带外源基因进入宿主细胞，并实现该基因的复制与功能表达。其保存方式主要有以下两种：1.直接保存法将质粒溶解于 TE 缓冲液中或无菌水中即可完成保存。具体保存时长因温度而异：4℃条件下可实现短期保存；-20℃环境中保存期限约为半年；若置于 - 80℃，则能延长保存时间。2.宿主保存法除直接保存质粒外，还可通过将质粒导入宿主菌（大肠杆菌为常用选择）的方式进行保存。大肠杆菌的长期保存可采用多种方法，如液体石蜡法、硅胶保存法，或在菌液中添加甘油、二甲基亚砜（DMSO）等保护剂。甘油菌的保存性能较为优异：-20℃条件下至少可保存一年；在 - 80℃或液氮环境中，保存期限可达 3-5 年，甘油菌的保存方法：由于甘油比较粘稠，所以我们可以将甘油与水1：1的混合，配成50%的甘油，并进行灭菌操作，再进行保菌处理的时候先在EP管中加入500μL的甘油，再加入500μL的菌液，充分混合，在EP管上标记信息，置于- 80℃长期保存，且复苏后细菌仍能正常生长，活力不受影响。建议保存时采取多管分装的方式。2菌种的复苏操作 复苏菌种时，可用接种环或牙签挑取少量冻结的菌种，接种至固体平板上，随后在 37℃条件下培养 8-12 小时。 需要注意的是从冰箱取出甘油菌后需置于低温环境或 0℃冰浴中，使用完毕后应及时放回冰箱。接种时需挑取表面已融化的部分，避免整体融解 —— 反复冻融易导致细菌细胞壁破裂。若细菌保存时间较长，可重新划平板，通过重新转化细菌的方式获取可用菌种。3病毒的稀释、分装与保存 1.病毒稀释操作对病毒进行稀释时，先将病毒置于冰浴中融解，之后用 PBS 缓冲液进行稀释，混合均匀后分装使用。2.避免反复冻融反复冻融会导致病毒滴度降低，每次冻融操作可能使滴度下降 10%，因此在病毒使用过程中需竭力避免此操作。建议在获取病毒后，依据每次的实际使用量进行分装处理。3.病毒保存要点病毒液通常需在 - 80℃条件下进行保存，在 6 个月内，病毒滴度不会出现显著下降，。若保存时间超过 6-12 个月，在进行实验前需重新测定病毒滴度。病毒使用时，从 - 80℃冰箱取出病毒后，需置于冰上进行融解，随后即可备用。若一次使用后仍有剩余，剩余病毒液可存放于 4℃冰箱，但需在一周内完成使用。 |
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