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细胞培养“翻车”？这些常见错误别再犯啦！
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细胞培养可是实验室里的“精细活”，稍不注意就容易“翻车”。那些常见的细胞培养操作错误，让你的细胞健康又茁壮！ 1️⃣ PART.01 复苏后细胞漂浮 01 细胞本身贴壁能力较弱 以细胞转染的明星细胞293T为例，它生长较快，但贴壁能力弱，容易出现成片脱落。解决办法是提前用明胶包被板子，增强吸附性，还可以使用TC处理的培养瓶/皿促进细胞贴壁。 02 培养条件不适合 293T细胞推荐使用DMEM（高糖）+10%FBS培养基，如果用错培养基，细胞可能生长不良甚至漂浮。解决办法是参照细胞使用说明书或实验室预实验结果，选用合适的培养体系。 03 复苏过程中操作不当 复苏时水温太低或太高都会损伤细胞。正确方法是从液氮罐中取出冻存管，立即放入37℃水槽中快速解冻，摇晃冻存管，确保1分钟内完成解冻。 04 去除冻存液中残留的DMSO过程，离心对细胞造成损伤 为防止DMSO毒性，很多小伙伴会离心去除上清，但这会损伤脆弱的细胞。解决办法是解冻后直接接种在培养皿内，隔天再换新鲜培养基去除DMSO。 2️⃣ PART.02 传代后细胞漂浮较多 01 胰酶消化时间过长 不同贴壁细胞的黏附能力不同，293T细胞消化时间为2-3分钟，A549细胞系则为5-6分钟。解决办法是缩短胰酶消化时间，以显微镜下观察到细胞变圆为标准。 02 过度吹打细胞带来机械损伤 吹打细胞时间过长或用力过度会带来机械应力。解决办法是胰酶使用前复温，以显微镜下观察到细胞变圆为标准，减少吹打次数和时间。 03 培养条件不适合 同PART.01 “细胞漂浮”问题解答。 04 细胞接种密度过高 细胞多，培养基营养成分不足。解决办法是细胞重悬均匀，推荐1:3或1:4的比例传代，接种后水平均匀晃动培养皿，保证细胞均匀分布。 3️⃣ PART.03 细胞生长太慢 01 细胞接种密度过低 细胞数量少，营养成分充足但生长慢。解决办法是根据细胞数量调整传代比例，适当增加接种细胞的初始浓度。 02 培养基配置/使用/保存不当 培养基在室温放置过久或血清批次问题会导致效能下降。解决办法是注意各组分保存温度及性状是否正常，使用效能稳定的血清。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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