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做cck8/MTT一定要避开这些坑!
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1、若是加药测细胞活力,首先判断是否带有颜色?若有颜色很可能与cck8/MTT反应,导致所有孔的od值乱乱的,这是需要做阴性对照,也就是:没有细胞,只加药的孔~最后:有细胞的孔od值➖阴性对照od值🟰最终od值 2、96孔板四周边缘的孔,不要加细胞检测,有概率污染,可以用pbs补充。 3、96孔板有些盖子和孔板不是很贴合,盖上以后检查一下是否完全盖上了?有些孔板需要大力磕一下才能完全盖上,盖不紧的话容易污染。 4、处理24小时可以用100ul细胞悬液,若处理48小时甚至更久,建议用200ul细胞悬液,但细胞量不变,只改变体积即可!细胞量可用1万/100ul~ 5、可做5个复孔,od值测出来后,舍去最大值and最小值,剩下的3个值作图,尽可能减少非必要的重复! 6、酶标仪测吸光度时,尽量不要有气泡,若有过多气泡,如果实验室有吹风机,可以用吹风机斜着吹1~2秒,气泡会立马消失的,不会影响结果~ 7、96孔板铺板不需要特意摇晃孔板混匀哦,细胞加进去即可,加药,加cck8以后,用手轻拍孔板侧边就行,然后再放入培养箱。 8、贴壁细胞比较简单,可换液,悬浮细胞铺板以后就不要再换液了。 毕合生物(www.bihebio.com)提供服务内容:分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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