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启真生物

新虫 (初入文坛)

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虫号: 36254487
注册: 2025-03-13
专业: 生物化学

[交流] 类器官染色与功能验证技术指南——细胞活性、增殖与死亡状态鉴定已有1人参与

评估类器官的健康状态和生长动态。

活/死细胞染色：

目的：快速区分活细胞和死细胞。

常用染料：钙黄绿素AM (Calcein-AM, 活细胞绿色荧光)，碘化丙啶 (PI, 死细胞红色荧光) 或 SYTOX系列染料。可直接在培养液中染色，活细胞成像观察。

鉴定要点：计算活细胞比例，观察死细胞分布（如是否集中在中心提示坏死）。

增殖标志物染色：

目的：检测处于增殖周期的细胞。

常用方法：

免疫染色： Ki67 (广泛使用的增殖核抗原)，PCNA。

EdU/BrdU掺入：在培养液中加入核苷类似物EdU或BrdU，它们会被合成DNA的细胞摄入。通过点击化学反应(EdU)或抗体检测(BrdU)可视化。更直接反映DNA合成期细胞。

鉴定要点：增殖细胞的比例及分布（如是否在预期的增殖区域，如隐窝底部、导管末端芽）。

凋亡检测：

目的：检测程序性死亡的细胞。

常用方法：

免疫染色： Cleaved Caspase-3 (凋亡执行关键分子)。

TUNEL法：标记DNA断裂末端（凋亡晚期特征）。

鉴定要点：凋亡细胞的比例及分布（正常发育中也可能有凋亡，需结合背景判断）。

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