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启真生物

新虫 (初入文坛)

[交流] 类器官染色与功能验证技术指南——细胞活性、增殖与死亡状态鉴定 已有1人参与

评估类器官的健康状态和生长动态。

活/死细胞染色:

目的: 快速区分活细胞和死细胞。

常用染料: 钙黄绿素AM (Calcein-AM, 活细胞绿色荧光),碘化丙啶 (PI, 死细胞红色荧光) 或 SYTOX系列染料。可直接在培养液中染色,活细胞成像观察。

鉴定要点: 计算活细胞比例,观察死细胞分布(如是否集中在中心提示坏死)。

增殖标志物染色:

目的: 检测处于增殖周期的细胞。

常用方法:

免疫染色: Ki67 (广泛使用的增殖核抗原),PCNA。

EdU/BrdU掺入: 在培养液中加入核苷类似物EdU或BrdU,它们会被合成DNA的细胞摄入。通过点击化学反应(EdU)或抗体检测(BrdU)可视化。更直接反映DNA合成期细胞。

鉴定要点: 增殖细胞的比例及分布(如是否在预期的增殖区域,如隐窝底部、导管末端芽)。

凋亡检测:

目的: 检测程序性死亡的细胞。

常用方法:

免疫染色: Cleaved Caspase-3 (凋亡执行关键分子)。

TUNEL法: 标记DNA断裂末端(凋亡晚期特征)。

鉴定要点: 凋亡细胞的比例及分布(正常发育中也可能有凋亡,需结合背景判断)。
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2楼2025-08-27 09:31:00
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