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类器官染色与功能验证技术指南——细胞活性、增殖与死亡状态鉴定 已有1人参与
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评估类器官的健康状态和生长动态。 活/死细胞染色： 目的： 快速区分活细胞和死细胞。 常用染料： 钙黄绿素AM (Calcein-AM, 活细胞绿色荧光)，碘化丙啶 (PI, 死细胞红色荧光) 或 SYTOX系列染料。可直接在培养液中染色，活细胞成像观察。 鉴定要点： 计算活细胞比例，观察死细胞分布（如是否集中在中心提示坏死）。 增殖标志物染色： 目的： 检测处于增殖周期的细胞。 常用方法： 免疫染色： Ki67 (广泛使用的增殖核抗原)，PCNA。 EdU/BrdU掺入： 在培养液中加入核苷类似物EdU或BrdU，它们会被合成DNA的细胞摄入。通过点击化学反应(EdU)或抗体检测(BrdU)可视化。更直接反映DNA合成期细胞。 鉴定要点： 增殖细胞的比例及分布（如是否在预期的增殖区域，如隐窝底部、导管末端芽）。 凋亡检测： 目的： 检测程序性死亡的细胞。 常用方法： 免疫染色： Cleaved Caspase-3 (凋亡执行关键分子)。 TUNEL法： 标记DNA断裂末端（凋亡晚期特征）。 鉴定要点： 凋亡细胞的比例及分布（正常发育中也可能有凋亡，需结合背景判断）。 |
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2楼2025-08-27 09:31:00