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琼脂糖凝胶电泳超详细攻略
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做分子生物学实验，琼脂糖凝胶电泳可是必备技能 1️⃣ 原理：分子筛效应+电泳原理 琼脂糖凝胶电泳，听起来高大上，其实原理超简单！琼脂糖是从藻类里提取的多糖，把它加热溶解在缓冲溶液里，冷却后就形成凝胶啦。这个凝胶有很多小孔，孔径大小跟琼脂糖浓度有关，浓度越高，孔就越小。 当核酸分子在电场里穿过凝胶时，小分子能快速通过小孔，大分子就被卡住，移动得慢。这就像是筛子一样，把不同大小的核酸分子分开啦。而且核酸分子带负电荷，在电场里会往正极跑，这就让它们分得更清楚啦。 2️⃣ 构造：四大关键部件 电泳槽：这是电泳的“主场”，上下两部分，上部放凝胶，下部装缓冲液。电泳槽两端连着正负极电极，给核酸分子提供“跑道”。 凝胶托盘：用来制备凝胶，上面有梳子状的样品槽模板，凝胶冷却后拔掉梳子，就形成了样品槽。 电源：给电泳提供稳定的直流电场，电压和电流可调，控制核酸分子的“奔跑速度”。 缓冲液：维持稳定的pH值和离子强度，让核酸分子在电场中顺利迁移。 3️⃣ 步骤：手把手教你做实验 ① 制备琼脂糖凝胶 根据实验需求，称取适量琼脂糖粉末，加入缓冲液，加热溶解，倒入凝胶托盘，插入梳子，冷却凝固后拔掉梳子，样品槽就做好啦。 ② 准备样品 把待分离的核酸样品加入上样缓冲液，混合均匀。上样缓冲液里有甘油让样品沉下去，还有染料方便观察。 ③ 上样与电泳 把凝胶放入电泳槽，加入缓冲液，用微量移液器把样品加入样品槽，注意别有气泡哦。连接电源，设置合适的电压和时间，核酸分子就会在电场作用下往正极跑啦。 ④ 染色与观察 电泳结束后，把凝胶放入染色液中染色，再用蒸馏水漂洗。最后把凝胶放在紫外透射仪上，就能看到不同大小的核酸分子形成的条带啦。 4️⃣ 电压和时间：影响分离效果的关键 电压：电压越高，核酸分子跑得越快，但过高会使凝胶发热，降低分离效果。一般电压在5 - 10V/cm之间。 电泳时间：时间越长，核酸分子跑得越远，但过长会导致条带模糊。一般30 - 60分钟就足够啦。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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