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类器官染色与功能验证技术指南——基础形态学观察与鉴定
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这是最基础也是最关键的起点，确保类器官具有正确的结构特征。 明场显微镜观察： 目的： 初步评估类器官的整体形态、大小、结构复杂性（如出芽、腔体形成）、均一性、生长状态（边缘清晰度、折光性）和数量。 方法： 直接在培养板/皿中或在低浓度基质胶滴中观察。可使用倒置显微镜。 鉴定要点： 大小与形状： 是否符合预期（如球状、囊状、管状、出芽状）？大小是否相对均一（可通过软件分析直径）？ 结构复杂性： 是否有空腔（lumen）形成？是否有分支/出芽结构（如肠道、乳腺类器官）？表面是否光滑？ 细胞密度： 是否致密？中心是否有坏死区域（发暗、结构松散）？ 生长状态： 边缘是否清晰锐利？折光性是否良好（提示细胞活性）？ 纯度： 是否有非目标细胞类型（如成纤维细胞）过度生长？ 组织学染色 (histological staining)： 目的： 在微观层面详细观察组织结构、细胞排列、极性、细胞类型分布以及特定结构（如杯状细胞、纤毛、腺体、分层结构）的形成。 样品制备： 类器官需收集、固定（常用4%多聚甲醛）、脱水、石蜡包埋或制作冰冻切片，然后切片。 常用染色： 苏木精-伊红染色： 最基础、最广泛使用。核染蓝色（苏木精），胞质和胞外基质染粉红色（伊红）。用于评估整体组织结构、细胞核形态、胞质特征、极性（如顶端-基底极性）、腔体形成、坏死/凋亡区域。 特殊染色： 阿尔新蓝染色： 特异性染色酸性粘多糖（如粘蛋白），用于鉴定杯状细胞（肠道、呼吸道类器官）。 pas染色： 染色中性粘多糖、糖原、糖蛋白等，也可用于杯状细胞和基底膜鉴定。 masson三色染色： 区分胶原纤维（蓝色/绿色）、肌肉（红色）、胞核（深蓝色）。用于评估类器官中基质成分或特定组织结构。 油红o染色： 染色脂滴（红色），用于鉴定脂肪细胞或含脂质的细胞（如肝类器官、脂肪肝模型） 鉴定要点： 与对应来源的体内组织切片进行形态学比较，评估其结构相似度（如隐窝-绒毛结构、腺泡结构、分层结构、特定细胞类型的空间分布）。 |
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