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倒平板，微生物实验的“地基”
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微生物实验里，“倒平板”可是基础操作！教你避开那些常见的坑，让实验成功率蹭蹭往上涨！ 1️⃣ 培养基温度：45℃ - 50℃是关键 倒平板时，培养基的温度超重要！一般固体培养基倾注的温度得在45℃ - 50℃之间。为啥呢？因为琼脂是培养基的主要凝固剂，它的凝固温度大概在40℃左右。要是培养基温度过高，琼脂还保持着液态，倒进培养皿后，凝固时间就会拖得很长，而且很可能凝固不均匀，后续实验操作就麻烦了。而且温度高了，培养皿盖上容易产生大量冷凝水，这些冷凝水要是滴到平皿里，菌层分布就会被干扰，尤其像做抑菌圈测定这种实验，冷凝水一多，抑菌圈都不准了。反过来，要是培养基温度过低，琼脂已经开始凝固，培养基就会变得黏糊糊的，很难均匀地倒进培养皿，最后形成的平板凹凸不平，微生物生长和分布也会受影响。 要是发现培养基温度不对，比如过高，可以用手心轻轻碰一下装培养基的三角瓶，感觉不烫，再用手背试试，手背感觉烫手，那温度大概在50℃左右，这时候倒平板最合适。要是培养基已经开始凝固，可千万别硬着头皮倒平板，得赶紧封口，用微波炉或者电磁炉重新加热，让它溶解后再冷却到45℃ - 50℃，接着再倒平板。 2️⃣ 防止冷凝水：这几个小技巧超实用 冷凝水是倒平板时的“大敌”，它会影响实验结果的准确性。为了避免冷凝水的形成，可以在培养基温度降到45℃ - 50℃的时候开始倒平板，这时候水蒸气蒸发得慢，冷凝水也会少一些。还有几种预防冷凝水的办法。比如倒平板的时候把培养皿盖打开，等全部倒完，把培养皿放在超净台里让它自然凝固5分钟，再关上皿盖，倒过来放，这样冷凝水就少了。或者把培养皿完全打开，等培养基凝固后再关盖，这种方法虽然不太严谨，但实际操作中效果还不错。再就是传统的垒叠法，倒培养基的时候，把培养皿一个接一个垒起来，静置直到全部凝固，然后再倒置备用。这样除了最上面的培养皿盖可能会有冷凝水，其他都不会有。要是最上面的平板倒好后，放个热水三角瓶或者热水平皿在上面，也能防止冷凝水。 3️⃣ 防止气泡：这些细节要注意 气泡也是倒平板时常见的问题，主要是因为培养基在摇匀的时候带进了空气。要是想避免气泡，可以在灭菌之前确保琼脂粉充分溶解。要是灭菌完了发现琼脂粉分布不均匀，需要摇匀，那最好在温度高的时候摇，这时候气泡会随着温度升高上升并自动消泡，但这方法有点危险，得小心操作。或者等培养基温度降到50℃ - 60℃的时候，轻轻沿着壁摇匀，让培养基整体沿着同一个方向摇动，直到完全均匀为止。要是灭菌后要加抗生素之类的试剂，记得在培养基温度降到45℃ - 50℃的时候加进去，然后轻轻沿着壁摇匀。要是已经冒出了很多气泡，而且消不掉，那就用微波炉之类的加热设备重新加热，让气泡从培养基里跑出来。 4️⃣ 培养基厚度：根据实验需求来调整 培养基的厚度会影响微生物的生长和分布，所以得根据实验需求来调整。拿90mm直径的培养皿来说，它的内高度大概在14 - 15mm，能盛100mL水。倒平板的时候，一般用20 - 25mL的培养基。其中，20mL的培养基高度大概在3mm左右，25mL的培养基高度大概在4mm左右。可以根据培养基的体积和培养皿的尺寸来大致确定培养基的厚度。其实也可以靠经验来掌握培养基的倒入量，倒平板的时候，先铺满整个培养皿底部，然后再稍微多倒一点，差不多就能控制在20mL左右；如果再多倒一点，就能达到25mL左右。多练几次，就能更准确地控制培养基的厚度了。 5️⃣ 实操小贴士：快速倒平板，减少暴露时间 倒平板的过程中，操作手法和步骤也会影响冷凝水的形成。以下是一些具体的操作技巧： 快速倒平板：在培养基温度降至45℃ - 50℃时，迅速将培养基倒入培养皿中，并立即轻轻晃动培养皿，使培养基均匀铺满底部。这样可以减少培养基在培养皿中停留的时间，从而减少水分蒸发。 避免长时间暴露：在倒平板时，尽量减少培养皿盖的打开时间。可以采用以下方法： 快速操作：在倒培养基时，迅速打开培养皿盖，倒入培养基后立即盖上皿盖。 分步操作：如果需要多次倒平板，可以先将培养皿盖打开，依次倒入培养基后，再统一盖上皿盖。这样可以减少培养皿盖暴露在空气中的时间，从而减少冷凝水的形成。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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