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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：质粒提取
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★
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提取质粒最关键的步骤在于加完溶液2的时候是不是裂解的彻底，如果菌液不澄清，就说明没有裂解好，以后的步骤做的再好也没用，必须保证裂解彻底。其次就是溶液3加完离心后，取的上清尽量别有蛋白，如果有蛋白会堵塞柱子，质粒就洗不下来。
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11楼2009-11-12 23:54:48
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小白3521

金虫 (小有名气)
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最近我也在提质粒，都不是很亮，后来师兄说在第一步菌液离心的时候最好多富集一些菌体，到时候提出的质粒会多一些
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12楼2009-11-13 09:18:32
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ljwei_163

金虫 (正式写手)
★
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提质粒按说好提啊，是不是你的菌液有问题那？
最好问下实验室的人提质粒的盒子是否有问题。
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13楼2009-11-13 09:26:20
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solopen

铜虫 (初入文坛)
★
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按分子克隆配试剂自己做我觉得比用试剂盒量提得大
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14楼2009-11-13 12:30:49
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自强8638

铜虫 (初入文坛)
★
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可能被降解了，还有可能是你的琼脂糖凝胶浓度太高了，浓度越高，分子筛效应越大，质粒又比较大，当然容易拖尾了。其次也可能是你的电泳电压过大；还有就是RNA污染，你提完质粒后没有用RNase降解，不过这就不叫拖尾了，称作有杂带。

至于注意事项，你搞清每一步的原理后自己仔细想想就知道了。时刻记住不要让质粒因为机械损伤而打断，不要让质粒被降解，尽量除去质粒内残存的乙醇，因为这会对接下来的酶切造成很大的影响。
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biotechnology
15楼2009-11-13 13:00:44
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grief

铜虫 (初入文坛)
★
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加裂解液2的时候这一步骤不要超过5min钟，你洗脱的时候可以洗两次！看效果会好好点不！
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等待秋天
16楼2009-11-14 15:18:21
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yayayatou

新虫 (初入文坛)
★
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试一试威格拉斯的试剂盒啊，不错的
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17楼2009-11-14 15:46:12
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hrbd1985

铁虫 (初入文坛)
★
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这个因素太多了，solution1加酶！！washbuffer加酒精！！！elutionbuffer预热！！！点样时适量多加点！！！测测浓度，看看有没有东西！！！
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18楼2009-11-14 16:57:53
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guangming111

银虫 (小有名气)
★
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我们没用过试剂盒，也提出质粒来了
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19楼2010-01-10 15:31:44
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