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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白表达温度问题
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★
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pet-28使用的是T7RNA聚合酶系统，需要DE3菌株，比如：BL21(DE3)等，否则是不会表达的。
引用回帖:
Originally posted by keer881 at 2009-11-18 21:13:57:
我是用大肠杆菌PET-28a表达的重组蛋白，带有His标签。用BL21不能表达，只能在Rosseta中的表达，表达时我做过几个温度，37度和30 度都不表达，只能25度过夜才能表达。表达量一般，超声后位于上清。我知道一般表达量 ...

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11楼2010-03-08 10:01:10
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泡泡9706

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主有没有检测一下37度和30度表达的时候有没有包涵体产生呢？
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12楼2010-03-08 11:01:02
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dy_414

木虫 (正式写手)
可溶性表达中，由于细菌本身对大量表达的外源性蛋白有抵制作用，因此在其折叠过程中不易形成天然构象，同时易导致二硫键错配，因此我个人认为降低温度主要是抑制目的蛋白的表达以减少包涵体的形成。

个人理解
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我坚信，rp是攒出来的
13楼2010-03-08 12:47:17
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