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shoujiangxu铜虫 (初入文坛)
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[交流]
多肽反应
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| 我在聚苯乙烯上修饰了-COOH ，我想让它和寡肽链进行是酰胺化反应，我是用EDC和NHS在室温下催化反应。请问这样条件下的话，寡肽链自身或链间也会发生酰胺化反应吗？多谢指教！ |
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shoujiangxu
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shoujiangxu(金币+5,VIP+0):非常感谢，呵呵！！ 11-10 09:52
shoujiangxu(金币+5,VIP+0):非常感谢，呵呵！！ 11-10 09:52
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你在实验过程中先用EDC/NHS处理你的聚苯乙烯，然后在和你要连接的寡肽链反应就可以了嘛 方法大概是这样的:（Pierce 的试剂盒说明） 1.在1ml聚苯乙烯的溶液中，加入0.4mg EDC(约2mM)和0.6mg NHS或1.1mg Sulfo-NHS (约5mM)，室温反应15分钟。 2.加入1.4ul 2-巯基乙醇(终浓度为20mM) 淬灭EDC。 3.备选：用合适孔径的凝胶过滤柱除去过量的还原剂和未活化的交联剂，并用活化缓冲液平衡。 4.在反应液中加入与聚苯乙烯等摩尔数的寡肽链，室温反应2小时。 5.反应液中加入盐酸羟胺使终浓度为10mM，用于淬灭任何尚存在于聚苯乙烯上的未反应的NHS(或Sulfo-NHS)，从而释放出原先的羧基。也可以采用其他的淬灭方法，比如加入20-50mM的Tris、赖氨酸，或乙醇胺。但是这些含伯胺基团的化合物会与聚苯乙烯上的羧基反应，形成副产物。 6.用步骤3中的凝胶柱除去过量的淬灭试剂 另外通过在NHS活化步骤使用pH5的MES缓冲液，或在两种蛋白交联的一步调节到更高的pH值(pH 7-8.5的磷酸盐或碳酸盐缓冲液)来缩短反应的时间。NHS活化蛋白后形成的活泼酯在pH5时的稳定性比高pH值时更稳定。 |
2楼2009-11-08 15:38:10
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