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细胞蛋白如何提取，简化版步骤来了（附注意事项和闭坑指南）
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一、细胞蛋白提取全流程 1. 实验前准备 - 裂解液：RIPA裂解液（含1%蛋白酶抑制剂+1%磷酸酶抑制剂，现用现配）； - 预冷设备：离心机（4℃）、冰盒、预冷PBS、冻存管； - 耗材：细胞刮刀（或胰酶消化法）、200μL/1.5mL EP管。 2.操作步骤 - A [弃培养基] --> B [预冷PBS洗2次]； - B --> C [加入裂解液 <br>（6孔板：每孔100μL）] ； - C --> D [冰上裂解30min <br> 每10min涡旋震荡15s]； - D --> E [4℃12000g 离心15min]； - E --> F [吸取上清至新EP管]； - F --> G [-80℃分装保存]。 二、致命失误闭坑指南 - 裂解液用量：细胞铺满80%的6孔板 → 100μL/孔（过多导致蛋白稀释，过少裂解不充分）； - 抑制剂失效：蛋白酶抑制剂需-20℃避光保存，解冻后24h内用完； - 离心温度：必须预冷离心机至4℃，否则蛋白降解。 三、关键注意事项 - 抑制降解：全程在冰上操作（裂解液接触细胞前必须预冷）； - 避免泡沫：涡旋震荡时勿产生气泡（导致蛋白变性）； - 核酸污染：高粘度样本需加DNase/RNase（否则WB条带拖尾）。 |
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