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生物实验| 细胞培养与操作の注意事项
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1.细胞来源与鉴定 需使用来源可靠、经过认证的细胞系，且定期进行细胞鉴定（如STR分型）和支原体检测，确保细胞身份纯正无污染。 2.培养基与试剂 需使用高质量、无菌的培养基、血清和添加剂，同时血清使用前需要灭活（如56℃，30min），注意有些特殊血清可能不需要或不能灭活； 所有液体加入细胞前需用水浴锅预热至 37°C，切记不能直接放进培养箱中预热，同时避免反复冻融试剂，尤其是血清、消化酶、抗生素，需分装使用。 3. 细胞观察与监测: 每天或至少隔天用显微镜观察细胞形态、密度、有无污染迹象（浑浊、漂浮物、异常 pH 变化），记录细胞传代日期、密度、形态、所用培养基、操作者、任何异常情况。 4. 传代 : 掌握合适的传代比例和时机（通常在指数生长期，汇合度 70-90%）； 胰酶或其他消化酶的作用时间和浓度要恰到好处，避免过度消化损伤细胞或消化不足导致细胞成团。消化后需用含血清培养基中和； 离心去除消化液/旧培养基时，转速和时间要温和（通常 1000 rpm，5 分钟）。 5. 冻存与复苏: 冻存: 选择对数生长期细胞，冻存密度适中，使用合适的冻存液（含 DMSO 或甘油和血清），采用程序降温或异丙醇冻存盒，最终存放于液氮气相中。做好备份！ 复苏: 快速解冻（37°C 水浴），立即用大量预温培养基稀释以降低 DMSO 浓度，轻柔离心去除冻存液后重悬于新鲜培养基。复苏后密切观察。 6. 污染防控: 细菌/真菌: 最易发生。严格执行无菌操作。培养基中常规添加抗生素（但长期培养可能掩盖低水平污染）； 支原体: 隐蔽性强，危害大！定期检测（PCR、培养、荧光染色），使用支原体清除剂或丢弃污染细胞，严格隔离操作； 交叉污染: 尤其在使用多种细胞系时风险高。严格分区操作、使用不同耗材、做好标记； 黑胶虫: 可能是微生物污染或血清中的成分，需仔细鉴别。 补充： 1.应实时、准确、详细地记录所有实验步骤、所用试剂批号、仪器型号参数、细胞状态、观察结果、异常情况、日期、操作者。实验记录本应规范装订，不得随意撕页。同时如有电子记录系统，也应规范填写； 2.所有样本管、培养皿、载玻片等必须标记清晰:，可使用耐溶剂、低温的记号笔或标签； 3.应及时对原始数据如图像、流式文件等进行备份。 |
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