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从零开始教你养细菌，一文掌握细菌培养核心要点
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实验室里那些让人又爱又恨的细菌培养。不管是新手小白还是老司机，这篇攻略都能帮你少走弯路，快拿小本本记下来吧📝！ 细菌培养的重要性 细菌培养在生物化学与分子生物学实验里可是个大热门，比如基因克隆与表达、DNA与RNA的提取、酶的生产、细菌与细胞共培养等等。今天就以大肠杆菌（生长周期短）和鸟分枝杆菌（生长周期长）为例，给大家讲讲细菌培养的核心要点。 实验步骤 1️⃣准备工作 培养基准备：大肠杆菌用LB培养基，鸟分枝杆菌用Middlebrook培养基。 试剂准备：蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、琼脂、抗生素（氨苄青霉素、羧苄青霉素、两性霉素B）等。 仪器、耗材准备：细菌培养皿、50mL无菌离心管、试管、锥形瓶、接种环、酒精灯、高压蒸汽灭菌锅、37℃恒温培养箱、生物安全柜、超净工作台、恒温摇床。 2️⃣实验步骤 （1）灭菌 配置培养基后，用高压蒸汽灭菌法121℃、30min灭菌。把培养皿、离心管、锥形瓶、接种环、酒精灯等放在超净工作台，紫外线照射至少30min。 （2）倒平板 根据细菌生长状况设置平板厚度。大肠杆菌10mL/平板（约3-4mm厚），鸟分枝杆菌20mL/平板（约5-6mm厚）。 （3）活化、接种 菌种来源可以是平板或-80℃保存的菌种。关闭紫外线，打开超净工作台通风，点燃酒精灯，灼烧接种环至红色，冷却后挑取适量菌落或菌液划线，使菌液从多到少分布在培养基表面。 （4）培养 用封口膜封好培养基，正置37℃恒温培养箱30min左右，然后倒置培养。 （5）观察 大肠杆菌一般12~16h观察生长状况，鸟分枝杆菌生长缓慢，需要1~4周左右。 （6）液体培养 挑取单菌落进行扩大培养。将液体培养基倒入无菌离心管或试管，灼烧接种环灭菌冷却后将菌落挑取伸入试管轻轻晃动，使菌落落入液体培养基，封口膜封闭试管或离心管，放置恒温摇床培养。 注意事项 无菌操作：所有物品和操作都要求无菌，防止杂菌污染。 调节pH值：灭菌前调节培养基pH值，LB培养基要求pH值在7.0~7.4之间。 充分溶解：培养基配置时，用蒸馏水充分溶解。 冷却后加入抗生素：抗生素、增菌液在培养基稍稍冷却至手可以正常触碰时加入，防止抗生素失效。 操作位置：所有物品放置在酒精灯周围，倒平板时注意操作顺序。 防止水汽：平板半敞开在酒精灯周围或叠放在酒精灯旁边，防止产生水汽。 特殊处理：鸟分枝杆菌生长周期长，需加入增菌液、抗生素，倒厚平板。 安全防护：鸟分枝杆菌有一定感染性，使用前60℃水浴灭活30min，操作时在生物安全柜中进行。 个人防护：实验操作过程中佩戴好手套、口罩、穿好实验服。 标记平板：标记好时间、菌种名称、培养条件等。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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