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夏末～易科新虫 (小有名气)
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小鼠骨髓间充质干细胞分离
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骨髓间充质干细胞分离 有需要做骨髓间充质干细胞分离的可以看过来。 1.采用脊椎脱臼或者戊巴比妥麻醉处死小鼠，使用75%酒精对小鼠进行消毒（可采用逆毛发喷湿或直接浸泡的方法），消毒后放入超静工作台或生物安全柜。2.用剪刀在小鼠背部横向剪开，直接用手将皮肤剥离，直到后爪，此处无法画全）。 3.用剪刀沿着胫骨和股骨将大部分的肌肉剥离，用手抓着股骨往上拉，另一只手拿着剪刀卡在股骨与盆骨之间，找到空隙将后肢分离。 4.一只手捏着胫骨，另一只手拿着剪刀卡在胫骨与后掌中间的空隙，轻轻分离脚掌注意这些关节部位的分离不需要用力剪，只需要多尝试找到关节空隙就可轻松分离。 5.此时用弯剪沿着骨头将大部分肌肉剥离，可用剪刀尖端插入骨头和肌肉的缝隙中，这样骨头上不会残留太多肌肉残渣。 6.接下来用剪刀将股骨和胫骨的韧带挑开，并将股骨与胫骨分离，然后用粗糙的擦手巾将骨头上多余的肌肉磨掉。 7.将处理干净的骨头放入a-MEM空白培养基中备用，所有的骨头处理完毕后，用剪刀剪开骨骺端，用5ml注射器搭配1ml针头，用空白培养基冲洗骨内腔，待骨髓冲洗至发白才能结束。 8.注意可直接在50ml离心管上放一个70um的细胞筛，避免骨骼碎片或者细胞块掉入。此外有的时候会直接冲出一条红色组织，那是红骨髓，不要丢弃，用1ml枪头吹散。 9.将收集起来的细胞悬液直接拿去离心（此时可进行细胞计数），500g/1000 rpm 5min，用a-MEM 10% FBS完全培养基重悬细胞，接种到培养瓶中。 10.48h后换液，去除未贴壁细胞。注意此时细胞贴壁还不算牢固，不要用枪头去吹，只需要晃动培养瓶将未贴壁细胞悬起来，然后吸除即可，不需要去得特别干净，之后每2-3天换一次液，大概7-10天可长满，用于后续实验。 发自小木虫手机客户端 |
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