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细胞培养污染大作战：鉴别与处理全攻略
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做细胞实验，最怕的就是污染！细胞污染不仅影响实验结果，还可能让你的实验全盘皆输😭。今天就来给大家唠唠，细胞培养中常见的污染类型、怎么鉴别，以及处理方法，赶紧搬好小板凳，认真听讲啦！ 细胞污染的“罪魁祸首” 1️⃣ 细菌污染：最常见，最明显 细菌污染是细胞培养中最常见的问题。一旦细菌混进培养液，变化很明显：培养液会迅速变浑，颜色发黄。这是因为细菌大量繁殖，消耗营养并排出代谢废物，导致培养液酸碱度下降。显微镜下观察，细菌形态各异，低倍镜下可能不太清楚，但高倍镜下，它们的形态和运动就很清晰。 2️⃣ 真菌污染：隐蔽，但危害大 真菌污染比较隐蔽。染上真菌后，培养液一般保持清亮，不会很快变浑，偶尔会发黄。显微镜下看真菌，形态很特别，通常是丝状或珊瑚状，这些丝就是菌丝。时间长了，还可能出现黑色丝状物。 3️⃣ 支原体污染：最隐匿的“杀手” 支原体污染是细胞培养中让人头疼的问题，有很强的隐蔽性。支原体很小，直径约0.1微米，比常规除菌过滤器孔径还小，过滤器很难截住它。从检测角度看，支原体污染很隐秘。它不会让培养液很快变浑，也不会导致细胞大片死亡。显微镜下，被支原体污染的细胞可能看起来正常，研究人员一开始很难发现污染。 4️⃣ 黑胶虫污染：特殊干扰 黑胶虫污染在细胞培养里挺特殊。显微镜下看，低倍镜就是黑色小点，高倍镜下能看见黑色物体在蠕动，这和细胞碎片之类的杂质很不一样。黑胶虫污染有个特点，培养基不会变浑，这让它在早期很难被发现。 污染的鉴别方法 1️⃣ 细菌污染 观察培养液：变浑、发黄。 显微镜观察：高倍镜下看到形态各异的细菌。 2️⃣ 真菌污染 观察培养液：轻微浑浊，发黄。 显微镜观察：丝状或珊瑚状结构。 3️⃣ 支原体污染 观察细胞状态：生长变慢、形态异常。 检测方法：PCR检测、支原体染色试剂盒。 4️⃣ 黑胶虫污染 观察培养液：无明显变化。 显微镜观察：黑色小点或黑色物体蠕动。 污染的处理方法 1️⃣ 细菌污染 轻度污染：在培养基里加抗生素，如四环素、庆大霉素。 重度污染：丢弃污染细胞，全面清理培养环境。 1️⃣ 细菌污染 轻度污染：在培养基里加抗生素，如四环素、庆大霉素。 重度污染：丢弃污染细胞，全面清理培养环境。 2️⃣ 真菌污染 处理方法：丢弃污染细胞，深度清洁培养环境，用75%酒精擦洗，必要时用新洁尔灭二次清洁。 3️⃣ 支原体污染 处理方法：用支原体清除培养基，如BM-Cyclin或Mycoplasma Removal Agent，处理时紧盯细胞状态。 4️⃣ 黑胶虫污染 处理方法：提高种板密度，尽早传代或冻存细胞，使用黑胶虫清除培养基。 预防污染的“防火墙” 1️⃣ 无菌操作要规范 在超净台操作时，穿实验服、戴手套和口罩不能马虎。拿取培养器具时，别直接上手，用无菌镊子或其他工具。 2️⃣ 定期检测不能少 每月做支原体检测，每季度做STR分型验证，能确认细胞身份，防非同种细胞污染。 3️⃣ 耗材质量得把关 选低内毒素的培养基和血清，对细胞健康很关键。 4️⃣ 环境维护要上心 每周清洁CO₂培养箱，保持实验室通风系统高效，过滤空气中的微生物和尘埃。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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