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异丙醇/乙醇沉淀DNA，原理大揭秘
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做分子生物学实验，DNA沉淀是个关键步骤！今天就来给大家唠唠，异丙醇和乙醇沉淀DNA的原理，还有怎么优化这个过程，赶紧搬好小板凳，认真听讲啦！ DNA为啥能在水里“漂”？ DNA是亲水性分子，由磷酸骨架和碱基组成。磷酸基团带负电荷，能吸引水分子中的正电荷部分，通过氢键等相互作用力稳定存在于水溶液中。这就像是DNA分子穿了一件“水衣”，让它能在水中均匀分散并保持溶解。 乙醇沉淀DNA的原理 1️⃣ 降低溶液极性，消除水化层 乙醇的极性比水小，加入后能取代部分水分子，把DNA分子的“水衣”给脱掉。这样，DNA分子之间的距离就拉近了，为聚集和沉淀创造了条件。 2️⃣ 降低电荷排斥 DNA分子带负电荷，在水溶液中会互相排斥。乙醇加入后，减少了水分子，DNA分子之间的静电排斥力降低，它们就能靠近了。 3️⃣ 中和负电荷 沉淀DNA时，通常会加盐，比如醋酸钠、醋酸铵。这些盐的阳离子能和DNA的负电荷结合，降低电荷密度，进一步减少静电排斥力，让DNA更容易聚集沉淀。 异丙醇沉淀DNA的原理 1️⃣ 极性差异 异丙醇的极性比乙醇还小，和水分子的相互作用更弱。加入异丙醇后，DNA分子更容易从水相转移到异丙醇相，为沉淀创造条件。 2️⃣ 降低溶解度 DNA在异丙醇中的溶解度比在水中低。加入异丙醇后，DNA的溶解度降低，就会聚集沉淀。 3️⃣ 促进DNA聚集 异丙醇减少了DNA周围的水分子，本身又不带电，没有静电排斥。加盐后，阳离子中和了DNA的负电荷，DNA分子就能更容易地聚集沉淀。 4️⃣ 减少盐共沉淀 相比乙醇，异丙醇沉淀DNA时，盐类杂质共沉淀的情况更少。这是因为异丙醇沉淀速度快，室温下就能完成，减少了盐离子和DNA结合的机会。 异丙醇和乙醇沉淀DNA的差异 1️⃣ 沉淀效果 异丙醇：沉淀速度快，室温下15-30分钟就能完成；所需体积小，只需0.6-0.7倍体积。 乙醇：沉淀速度慢，需在-20℃下放置30分钟至1小时；所需体积大，需2倍体积的无水乙醇或2.5倍体积的95%乙醇。 2️⃣ 杂质含量 异丙醇：沉淀的杂质相对较多，沉淀后需用75%乙醇洗涤。 乙醇：沉淀的DNA更纯净，杂质含量少。 优化沉淀效果的小贴士 1️⃣ DNA浓度 DNA浓度高，沉淀效果好；浓度低，沉淀困难。如果DNA浓度低，可以适当浓缩后再沉淀。 2️⃣ 盐离子种类和浓度 选择合适的盐离子，比如醋酸钠或醋酸铵，浓度要适中，避免过高或过低。 3️⃣ 乙醇和异丙醇的用量 根据实验需求，选择合适的沉淀剂和用量。异丙醇沉淀速度快，适合快速实验；乙醇沉淀效果更纯净，适合对纯度要求高的实验。 4️⃣ 温度和时间 乙醇：低温（-20℃）沉淀效果好，但时间要控制在30分钟至1小时。 异丙醇：室温下沉淀，时间控制在15-30分钟。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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