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DNA荧光探针猝灭：原理、方式及应用全解析
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DNA荧光探针的猝灭机制是不是让你觉得很神秘？今天就来给大家唠唠，这个看似复杂的过程，其实是怎么一回事，赶紧搬好小板凳，认真听讲啦！ DNA荧光探针的基本原理 DNA荧光探针是一种检测DNA序列的工具。它由与目标DNA序列互补的寡核苷酸序列组成，两端或特定位置标记有荧光基团和猝灭基团。荧光基团能吸收光能并发射荧光，而猝灭基团则能吸收或转移荧光，降低或消除荧光信号。 当探针与目标DNA序列杂交时，荧光基团和猝灭基团的距离和相对取向改变，荧光信号强度也随之改变。这就像是一个“开关”，控制着荧光的亮灭。 DNA荧光探针的猝灭方式 1️⃣ 荧光共振能量转移（FRET） FRET是一种非辐射能量转移，发生在距离较近且光谱匹配的两个荧光分子之间。荧光基团是供体，猝灭基团是受体。激发时，能量转移到猝灭基团，荧光信号猝灭。效率取决于它们的距离、取向和光谱重叠。 2️⃣ 电荷转移 电荷转移指激发态荧光分子中的电荷在原子或基团间转移，导致荧光猝灭。在DNA荧光探针中，可能发生在荧光基团与DNA骨架或猝灭基团之间。电荷转移消耗激发态能量，使荧光无法发出。 3️⃣ 光诱导电子转移（PET） PET指荧光分子中的电子在光激发下从供体转移到受体。在DNA荧光探针中，PET发生在荧光基团与猝灭基团或DNA骨架之间。转移时，能量转移到猝灭基团或骨架，荧光信号猝灭。效率取决于供体与受体的电子转移效率。 4️⃣ 分子内猝灭 分子内猝灭中，荧光基团和猝灭基团位于同一分子，距离和取向固定。激发时，能量直接传递给猝灭基团，荧光信号猝灭。常见于分子信标和发夹探针等特定结构的荧光探针。 DNA荧光探针猝灭的实际应用 1️⃣ 基因检测 荧光探针用于检测基因的存在、缺失或突变。PCR时加探针，杂交时荧光信号变化，可定量检测目标基因。 2️⃣ 蛋白质检测 荧光探针可用于蛋白质检测。通过与蛋白质结合位点相连，观察荧光信号变化，判断蛋白质存在或构象变化。 3️⃣ 药物筛选 荧光探针用于药物筛选。与待测化合物结合，观察信号变化，评估相互作用，判断药理活性。 4️⃣ 细胞成像 荧光探针用于细胞成像。与细胞内特定分子或信号通路结合，观察信号变化，实现分子或信号通路的实时监测和成像。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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