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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 紧急在线求助(关于SDS-PAGE,并且带图)

请求那位高人给我指点啊,我也不嫌丢人了,我把片子发上来,大家给我出出主意,我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,手艺实在是太差了,拿不出门啊,但是我周围的同学也没有做过的,我只能求助于论坛上各位大哥大姐了,希望大家多多给我出主意,多多给我指点啊
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zxx0914

金虫 (小有名气)

我觉得是电压的事吧,
2楼2009-11-07 12:50:02
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guojing0000

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zxx0914 at 2009-11-7 12:50:
我觉得是电压的事吧,

能给点具体的指导吗?电压是大了,还是小了,谢谢啦啊
3楼2009-11-07 12:53:00
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pph0259

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 11-7 15:25
上样不干净,各个泳道的样品发生混合!

制胶时是否凝固正常?不要加过多的催化剂!

制胶的试剂是否合格?

一般电压100-130V
4楼2009-11-07 14:15:22
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guojing0000

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pph0259 at 2009-11-7 14:15:
上样不干净,各个泳道的样品发生混合!

制胶时是否凝固正常?不要加过多的催化剂!

制胶的试剂是否合格?

一般电压100-130V

请问能给具体的指导吗?上样不干净的问题怎么解决啊?
我的胶凝的还挺正常,试剂也是新买的,合格啊,希望多多给我指点
5楼2009-11-07 14:36:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-7 15:25
引用回帖:
Originally posted by guojing0000 at 2009-11-7 12:33:
请求那位高人给我指点啊,我也不嫌丢人了,我把片子发上来,大家给我出出主意,我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,手艺实在是太差了,拿不出门啊,但是我周围的同学也没有做过的,我只能求助于论坛上各位大哥大姐 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1262941&fpage=2

这里面说得很全了,仔细看。严格按照做,一点问题都没有。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-11-07 15:21:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by guojing0000 at 2009-11-7 12:33:
请求那位高人给我指点啊,我也不嫌丢人了,我把片子发上来,大家给我出出主意,我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,手艺实在是太差了,拿不出门啊,但是我周围的同学也没有做过的,我只能求助于论坛上各位大哥大姐 ...

许多结果出错,一两句话是找不出原因的。
只有具体看到你做的时候,才会一眼看出问题的。建议你先去有经验的实验室学几天吧,这样自己也少走弯路!!!

我看主要的原因可能是
(1)你配置的胶有问题。SDS质量问题?浓度问题?!

(2)电泳缓冲液问题。例如看有过多的杂质离子,尤其是K+ 和磷酸根。

(3)样品没有处理好。是不是样品Buffer成份问题?是不是样品处理操作问题?

等等啊!!
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-11-07 16:08:07
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guojing0000

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-11-7 16:08:



许多结果出错,一两句话是找不出原因的。
只有具体看到你做的时候,才会一眼看出问题的。建议你先去有经验的实验室学几天吧,这样自己也少走弯路!!!

我看主要的原因可能是
(1 ...

谢谢啦,太感谢了,我们学校没有做生物的,我们是第一个这样的生物实验室,设备也是刚买了,所以我没有学习的条件啊,只能自己摸索啊,并且只能在网上求助了,我还有一个问题想请教你,就是我用我们实验室的凝胶成像分析系统分析胶,这台仪器有4种光,分别是白光、365nm,300nm,254nm,我应该用哪个扫描呢?我今天自己发明了一种办法,就是在凝胶下面垫了一张白纸弄得。。。不垫白纸的话什么都看不见啊,能给我指点一下这个怎么操作吗?谢谢啦
8楼2009-11-07 16:36:06
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syzzam

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1. 你的AP、TEMEd加的太多了,一般凝胶聚合的速度过快才会导致凝胶边缘类似毛刺的现象;
2. 样品加的太多了,而且处理后没有离心;
3. 配分离胶是封胶封的不好,这个要慢慢习熟练了就ok了;胶凝后要用水或缓冲液冲洗一下去除未聚合的单体;

这个是看起来比较明显的问题。
好好看看相应的书吧,注意实验的细节
我的小窝biotf.cn
9楼2009-11-07 16:49:20
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pidou

木虫 (正式写手)

不用电白纸
10楼2009-11-07 16:49:24
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