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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紧急在线求助（关于SDS-PAGE,并且带图）
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guojing0000

木虫 (小有名气)

[交流] 紧急在线求助（关于SDS-PAGE,并且带图）

请求那位高人给我指点啊，我也不嫌丢人了，我把片子发上来，大家给我出出主意，我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，手艺实在是太差了，拿不出门啊，但是我周围的同学也没有做过的，我只能求助于论坛上各位大哥大姐了，希望大家多多给我出主意，多多给我指点啊
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1楼 2009-11-07 12:33:56
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zxx0914

金虫 (小有名气)
我觉得是电压的事吧，
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2楼2009-11-07 12:50:02
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guojing0000

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zxx0914 at 2009-11-7 12:50:
我觉得是电压的事吧，

能给点具体的指导吗？电压是大了，还是小了，谢谢啦啊
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3楼2009-11-07 12:53:00
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pph0259

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3,VIP+0): 11-7 15:25
上样不干净，各个泳道的样品发生混合！

制胶时是否凝固正常？不要加过多的催化剂！

制胶的试剂是否合格？

一般电压100-130V
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4楼2009-11-07 14:15:22
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guojing0000

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pph0259 at 2009-11-7 14:15:
上样不干净，各个泳道的样品发生混合！

制胶时是否凝固正常？不要加过多的催化剂！

制胶的试剂是否合格？

一般电压100-130V

请问能给具体的指导吗？上样不干净的问题怎么解决啊？
我的胶凝的还挺正常，试剂也是新买的，合格啊，希望多多给我指点
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5楼2009-11-07 14:36:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 11-7 15:25
引用回帖:
Originally posted by guojing0000 at 2009-11-7 12:33:
请求那位高人给我指点啊，我也不嫌丢人了，我把片子发上来，大家给我出出主意，我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，手艺实在是太差了，拿不出门啊，但是我周围的同学也没有做过的，我只能求助于论坛上各位大哥大姐 ...

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=1262941&fpage=2

这里面说得很全了，仔细看。严格按照做，一点问题都没有。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-11-07 15:21:19
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by guojing0000 at 2009-11-7 12:33:
请求那位高人给我指点啊，我也不嫌丢人了，我把片子发上来，大家给我出出主意，我第一次跑变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，手艺实在是太差了，拿不出门啊，但是我周围的同学也没有做过的，我只能求助于论坛上各位大哥大姐 ...

许多结果出错，一两句话是找不出原因的。
只有具体看到你做的时候，才会一眼看出问题的。建议你先去有经验的实验室学几天吧，这样自己也少走弯路！！！

我看主要的原因可能是
（1）你配置的胶有问题。SDS质量问题？浓度问题？！

（2）电泳缓冲液问题。例如看有过多的杂质离子，尤其是K+ 和磷酸根。

（3）样品没有处理好。是不是样品Buffer成份问题？是不是样品处理操作问题？

等等啊！！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
7楼2009-11-07 16:08:07
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guojing0000

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by HarveyWang at 2009-11-7 16:08:



许多结果出错，一两句话是找不出原因的。
只有具体看到你做的时候，才会一眼看出问题的。建议你先去有经验的实验室学几天吧，这样自己也少走弯路！！！

我看主要的原因可能是
（1 ...

谢谢啦，太感谢了，我们学校没有做生物的，我们是第一个这样的生物实验室，设备也是刚买了，所以我没有学习的条件啊，只能自己摸索啊，并且只能在网上求助了，我还有一个问题想请教你，就是我用我们实验室的凝胶成像分析系统分析胶，这台仪器有4种光，分别是白光、365nm，300nm，254nm，我应该用哪个扫描呢？我今天自己发明了一种办法，就是在凝胶下面垫了一张白纸弄得。。。不垫白纸的话什么都看不见啊，能给我指点一下这个怎么操作吗？谢谢啦
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8楼2009-11-07 16:36:06
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syzzam

木虫 (正式写手)
★
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1. 你的AP、TEMEd加的太多了，一般凝胶聚合的速度过快才会导致凝胶边缘类似毛刺的现象；
2. 样品加的太多了，而且处理后没有离心；
3. 配分离胶是封胶封的不好，这个要慢慢习熟练了就ok了；胶凝后要用水或缓冲液冲洗一下去除未聚合的单体；

这个是看起来比较明显的问题。
好好看看相应的书吧，注意实验的细节
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我的小窝biotf.cn
9楼2009-11-07 16:49:20
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pidou

木虫 (正式写手)
不用电白纸
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10楼2009-11-07 16:49:24
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