| 查看: 1231 | 回复: 0 | |||
[交流]
CCK8/MTT实验，这些坑你必须避开！
|
|
做细胞增殖实验，CCK8和MTT是常用的方法。但这两个实验可有不少坑，今天就来给大家唠唠，怎么避开这些坑，让实验结果又准又稳，赶紧搬好小板凳，认真听讲啦！ CCK8实验：灵敏又方便，但细节不能马虎 1️⃣ 细胞准备与接种 细胞接种可不能马虎，要保证细胞均匀分布，避免细胞沉淀。接种时混匀细胞悬液，用多道移液器保证每孔细胞数量一致。细胞密度过高或过低都不行，密度过高细胞会发生接触抑制，生长缓慢，甚至部分细胞死亡；密度过低细胞生长缓慢，实验结果不准确，重复性差。根据细胞类型和实验目的，通过预实验确定最佳的细胞接种密度。 2️⃣ 试剂使用 CCK-8试剂对光和温度敏感，需避光保存，使用前在室温下平衡。加入CCK-8试剂时避免产生气泡，防止干扰OD值读取。加入试剂后轻轻晃动培养板以帮助混匀。 3️⃣ 孵育时间 孵育时间需根据细胞类型和数量摸索，通常1-4小时，白细胞等显色较弱的细胞可能需要更长时间。对照组吸光度接近1.0时为最佳孵育时间。 4️⃣ 结果检测 确保酶标仪预热并校准，避免周围环境干扰。设置多个复孔以减少实验误差。若暂不测定OD值，可加入适量酸性溶液或SDS溶液保存。 MTT实验：经典但繁琐，操作要规范 1️⃣ 细胞准备与接种 细胞接种后需预培养一段时间使细胞贴壁。同CCK-8实验，需确保细胞均匀分布和合适的细胞密度。 2️⃣ 试剂使用 MTT试剂需现用现配，避免长时间暴露在空气中。加入MTT后孵育时间一般为3-4小时。溶解甲瓒晶体时需使用DMSO等有机溶剂，溶解过程需充分且避免气泡。 3️⃣ 结果检测 使用酶标仪在570 nm或590 nm波长处测定吸光度。设置调零孔、对照孔和加药孔，以确保结果准确。 通用注意事项 1️⃣ 预实验 首次实验时需进行预实验，摸索合适的细胞铺板量和孵育时间。 2️⃣ 药物处理 若研究药物对细胞的影响，药物浓度梯度设置要合理，加药时间点需在细胞贴壁且生长状态良好时。 3️⃣ 实验环境 整个实验过程需在无菌条件下进行，避免污染。 改进建议 1️⃣ 预实验 通过预实验确定最佳的细胞接种密度。一般来说，96孔板的细胞接种密度建议为1×10³ - 1×10⁴个细胞/孔。 2️⃣ 优化培养条件 确保细胞在培养过程中获得充足的氧气、营养物质和生长空间，以促进细胞的正常生长。 3️⃣ 均匀分布 在接种细胞时，要确保细胞在培养板中均匀分布，避免细胞聚集或分布不均。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
回复此楼» 猜你喜欢
本人考085602 化学工程 专硕
已经有4人回复
-
伙伴们，祝我生日快乐吧
已经有22人回复
-
调剂
已经有7人回复
-
289求调剂
已经有5人回复
-
一志愿武理314求调剂
已经有6人回复
-
欢迎申博同学联系
已经有5人回复
-
288求调剂
已经有4人回复
-
国自科面上基金字体
已经有4人回复
-
梁成伟老师课题组欢迎你的加入
已经有6人回复
-
274求调剂
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
20